[前处理分享】+蔬菜水果中农残能力验证之实验验证篇
自从接到省农产品质量安全检测中心下发的关于2018年河南省农产品质量安全检测技术能力验证的通知，为迎接此次能力验证，也为能顺利通过验证，我们前期进行了一系列的准备工作，详情请见【前处理故事】+蔬菜水果中农残能力验证之准备篇 https://bbs.instrument.com.cn/topic/6998006。
10月9日中午张工从省农产品质量安全检测中心领会盲样样品A14（苹果）和B28(笋瓜)，我们需要对样品中所加的某几种农药进行定量检测，先将整个过程整理出来与大家一起分享和探讨。
一、材料与方法
1．检测样品
本次能力验证发放的样品为已破碎蔬菜、水果样品，由省农产品质检中心统一加入农药标液，对每个实验室发放了二个蔬菜样品，二个水果样品，其中均为一个空白样品，一个加标样品。每个样品均200g。其中水果样品中的苹果也是第一次做为盲样考核样品进行检测。另外今年领会的样品也与往年不同，往年能力验证发放的样品为一个空白两个平行加标均为25g样品正好用于检测，而今年发放的样品是一个空白一个加标二个样品均为200g，检测时再按标准称量。
图1：样品对比
2.仪器及试剂
gc450气相色谱仪（美国布鲁克公司），PFPD、ECD检测器，高速分散均质机、氮吹仪、快速混匀器。乙腈（色谱纯）、正已烷（色谱纯）、丙酮（色谱纯）、氯化钠（分析纯）。
3．检测方法
本次能力验证活动为了能准确了解参加实验室农产品检测的实际能力状况，对检测方法作了统一要求，均采用《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法》（NY/T 761-2008）进行检测。
4．检测项目
甲胺磷、氧乐果、甲拌磷、对硫磷、甲基对硫磷、甲基异柳磷、水胺硫磷、乐果、敌敌畏、毒死蜱、乙酰甲胺磷、三唑磷、丙溴磷、杀螟硫磷、二嗪磷、马拉硫磷、亚胺硫磷、伏杀硫磷、辛硫磷、氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、联苯菊酯、氟胺氰菊酯、氟氰戊菊酯、三唑酮、百菌清、异菌脲、六六六共32种农药。
5．实验条件
气相色谱仪的精密度、稳定性、重现性都会影响到分析结果的准确性。选择合适的气流、柱温、进样口温度、检测器温度、色谱柱等条件都至关重要。
有机磷的检测条件：色谱柱：DB-1701（30m×0.25mm×0.25um）；温度：80℃保持1min，以20℃速度上升到130℃，再以5℃上升到200℃，再以15℃上升到250℃，保持11min。进样体积：1uL；进样品：250℃，不分流进样；检测器300℃；进样口温度：250℃；氮气流速：30mL/min；柱流速：2mL/min；空气：17mL/min；氢气14mL/min。
有机氯的检测条件：色谱柱：DB-5MS（30m×0.32mm×0.25um）；温度：80℃保持1min，以15℃速度上升到280℃,保持10.33min。进样体积：1uL；进样口：250℃，不分流进样；检测器300℃；进样口温度：250℃，氮气流速：30mL/min；柱流速：2mL/min。
二、实验过程
1．解冻与混匀
由于领回来的样品均为冷冻，需及时解冻然后混匀才能进行前处理。
1.1自然解冻后用温水再次解冻
1.2超声波中继续解冻
1.3混匀器上混匀
1．4用小勺搅拌均匀
图2：混运及搅拌
2.前处理过程
2.1准确称取样品25.0g，称取5-7克盐。
2.2两个空白样与四个加标样品分别加入50mL乙腈。
图3：称取样品、盐及加入乙腈
2.3匀浆及过滤
图4：匀浆及过滤
2.4剧烈震荡具塞量筒、吸液及80度氮吹
图5：剧烈震荡、吸液及氮吹
2.5氮吹近干时，加5mL丙酮。盖铝箔，在混匀器上混匀。用一次性针管吸液，加滤膜过滤膜后打入2ml进样瓶上机测定。
图6：有机磷混匀过滤膜后打入小瓶
2.6预淋洗小柱、丙酮+正已烷(10+90) 淋洗小柱、50度氮吹、加盖铝箔。正己烷定容，混匀，吸取2mL至进样瓶，上机测定。
图7：淋洗小柱、氮吹及定容
二．结果判定
1、溶剂标液计算结果
前处理的过程很顺利，接下来就是等待和判定结果，由于前期我们做了加标模板，处理图谱上节省了很多时间。
10P图谱
11P图谱
13CL图谱
经过讨论判断，得出以下判断，可能是甲拌磷、甲基对硫磷、异菌脲，氟氯氰菊酯、敌敌畏、毒死蜱、甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯，可能含量是如下图，按照气相上的保留时间判定，有些农药是否含有不确定，需要上气质液质从新判定
表1：溶剂标计算结果
上图为样品A14两张重叠对比图谱，蓝色为13CL模板，红色为样品加标图，由此可见甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯可完全重叠，但三唑酮不能完全重叠，如果按照气相上的保留时间±0.2以内都可判定为是，所以只能拿到气质上重新测定判断。重新判定后该物质不是三唑酮，故排除。
上面的这张图谱是B28样品与11P的对比重叠图，红色为11P模板图，蓝色为样品B28 图谱，两张重叠后可清晰地看出甲基对硫磷完全重合，而甲拌磷不能重合，两者相差0.08min在气相上无法断定到底是不是，只好上气质、液质再次进样判定。判定结果可将其排除。
2、配基质标液计算结果
根据计算公式：标液浓度×吸出量=所配标液浓度×容量瓶容量，将A14、B28空白样品前处理第二次氮吹后定容的5.0mL液体，倒入2mL进样小瓶进样，其余3mL留做配制混标，此溶液为基质溶液。
①敌敌畏标液浓度为10ug/mL，按公式计算需吸28ul到2mL容量瓶中，配制浓度为0.14ug/mL
②毒死蜱标液浓为10ug/mL,按公式计算需吸54ul到2mL容量瓶中，配制浓度为0.27ug/mL
③甲基对硫磷的标液浓度为10ug/mL,需吸46ul到2mL容量瓶中，配制浓度为0.23ug/mL
④甲氰菊酯的标液浓度为10ug/mL,需吸60ul到2mL容量瓶中，配制为0.30ug/mL
⑤三氟氯氰菊酯标液浓度为10ug/mL，按公式计算需吸40ul到2mL基质溶液中，配制浓度为0.20ug/mL
⑥异菌脲标液浓为10ug/mL,按公式计算需吸20ul到2mL基质溶液中，配制浓度为0.10ug/mL
⑦氟氯氰菊酯的标液浓度为10ug/mL,需吸12ul到2mL基质溶液中，配制浓度为0.060ug/mL，配制完成后上机测试峰面积和保留时间。
3、不平行怎么办？
表2：基质标记算结果
基质加标进气相作为模板重新计算加标样品，由上图可看出A14样品不平行，没时间多想，重新称样，重做前处理上机测定，得出结果为A14-3敌敌畏：0.14、毒死蜱：0.28、甲氰菊酯：0.29、三氟氯氰菊酯：0.21，得此结果不知道是称样前没搅拌均匀还是前处理过程出现问题，只好选用A14-1和A14-3这两个结果相近的报结果。
4、报最后结果
14号样品原始记录
28号样品原始记录
三．总结
1.样品的充分混匀至关重要，尤其对于粘稠的样品。样品没有充分混匀，平行样品不平行，做判断时太痛苦了，一是能力验证样品制作单位，在加入标液后，要对样品充分混匀，二是参加单位，拿到样品后，要进行两次混匀，这样才能确保平行样品平行。
2.用基质标液计算出样品结果后，可以自行配制同样的加标浓度进行加标回收率试验，结果与盲样结果相比较，相近就可以上报结果了。
3.前期充分的准备工作，为后面的工作节省了时间和精力。
4.氮吹时一定要注意气流大小，气流大了容易把液体吹出造成损失，气流太小吹的时间长，会影响回收率，也不要完全吹干，会造成回收率偏低。
5．过小柱是为了净化，除去样品中色素及杂质。关键点是小柱不要干，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入净化溶液。小柱干了不容易洗脱，农药会留在小柱上，洗不下来。
6．定容一定要准确。
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