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学做方法开发第一个礼拜遇到的问题及记录

液相色谱(LC)

  • 来上海至今一个礼拜,作为一个毕业三年在药厂工作的小雏鸟,这一个礼拜在研究所干的挺懵的,遇到了很多不会的,问人也遭到老师傅的嫌弃……
    捋了一些我遇到的问题,可能不是完全准确,请站内经验人士多补充改进,想尽快上手……不然就得打道回府了??????
    其二,由于不知浓度,配了一个高浓度的样品进样,导致几针平头峰,柱子可能也因此污染了,进空白总有一些古包和波动。

    以后尽可能固定进样量,降低浓度。且添加前后洗针程序,出现平头峰后,后面进样的峰的污染,多来源于进样针的残留,配比50%甲醇的洗针液,进样前后洗针。
    柱子有污染,我用100%乙腈冲洗柱子后发现出了很多杂峰,冲洗1小时后,进空白仍有包凸起,后用10%乙腈冲洗,略有改善,仍有凸起的峰,但是不影响样品进样的出峰,于是积峰时不计入样品纯度计算。

    其三,使用的是二极管阵列检测器,不知道如何选择样品波长,后请教两位老师傅,得出以下选择方式。
    如果所需要观察的峰为主峰,则选择主峰响应值高的波长,如果所需要观察的峰为杂质峰,则选择杂质峰响应高的波长。

    以上我有个问题,那么我们在计算纯度时选择的波长是应该优于主峰的吗?
    其一,领导让检测一个盐酸盐类的物质,沸点200,约9个C,无双键。不知如何检测,自己用0.1%磷酸和乙腈流动相溶了进液相……无峰。
    后领导带着去问老师傅,用气相检测。
    用1%左右的氢氧化钠碱化,后用一倍体积的水洗,之后用二氯甲烷溶解,取二氯甲烷进样气相

    以上我不解的有1,老师傅说有酸,不可进气相,让碱话,调至7左右的PH,这个我不太懂,为什么有酸不可以。2,用水洗去盐类,再次检测出来的纯度还是原来产品的纯度吗?
    其四,柱效高的柱子可以缩短出峰时间而无需通过改变梯度,同梯度下,岛津SHIM PACK GIST C18柱,出峰比XBRIDGE C18柱晚四分钟左右。
    不同的泵会影响流动相的混合,影响基线漂移情况。并联泵优于串联泵,串联泵由电磁阀混合。

    其五,用重量分析法测定某物质的含量,
    液相分析出其纯度,用其他方法,得出灰分,干燥失重,溶剂残留等,用面积归一法的纯度*(1-灰分%-干燥失重%-溶剂残留%),

    以上我想问的是,一个未知分析方法的样品,我们需要知道哪些性质才可以猜测其分析方法,比如沸点,熔点之类的。那么我们液相一般通用的分析方法是什么呢?

    还有,如何选择未知样品的分析是气相还是液相
    以上仅仅是这一个礼拜以来所接触到的一些问题,并不代表就是标准,如果有错误的或者比较幼稚的问题……请各位师傅多多包涵……感谢
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  • 检测老菜鸟

    第1楼2019/03/24

    应助达人

    你那个其二问题在哪里,你是问这样操作可以不,还是问如何解决鼓包?

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  • 检测老菜鸟

    第2楼2019/03/24

    应助达人

    其一的那个,气相不能进酸?这个绝对了,跟你的气相色谱柱有关。这个相当于衍生化步骤,如果是检测纯度的,应该可以

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  • 检测老菜鸟

    第3楼2019/03/24

    应助达人

    其三那个,要综合考虑波长的选择。

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  • 检测老菜鸟

    第4楼2019/03/24

    应助达人

    其四和其五的问题勒?一个未知分析方法的样品,我们需要知道哪些性质才可以猜测其分析方法,比如沸点,熔点之类的。
    那么我们液相一般通用的分析方法是什么呢?通用分析方法,额,水酸碱甲醇乙腈缓冲盐,基本这些。

    还有,如何选择未知样品的分析是气相还是液相气相做不了的拿液相做,比如易分解,沸点高的。

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  • 浪淘沙隐

    第5楼2019/03/25

    其二,我想强调的是,进样量是色谱参数的一部分,不要被岛津工作站带偏,不要随意改动进样量。至于一开始从多少浓度开始,我建议是0.5-1mg/ml,建议进样量5μl
    样品出现鼓包,如果冲洗仪器不能解决,很有可能是流动相不合适,或者供试品带有强酸或强碱,或是其他活性物质。试试调节流动相pH或问问合成样品性质。
    其三,波长问题一句两句话说不清楚,网上相关文章很多。
    其一,一般盐类物质不能直接进气相,如果非要进气相,最好能游离,比如那位老师傅介绍的方法。这是因为盐类物质沸点高,难以气化,容易污染仪器。至于你说的那个物质沸点是200,要弄清楚是游离碱沸点200还是盐的沸点是200,我怀疑你弄错了。你疑虑的游离后的纯度还是不是真实的纯度,你的疑问是有一定道理,但没有更好的办法了。
    其四,其五,不存在未知样品一说,我们在在分析时,一定要清楚样品的性质,而且你要清楚GC和HPLC的检测原理,才能知道用什么方法做。比如,如果你知道了气相进样口温度的作用和色谱柱的最大耐受温度,就能知道气相一般分析沸点300度以下的物质;液相常用的紫外检测器只能检测有紫外吸收的物质,如果没有紫外检测器,就需要用到其他检测器。等你了解了这些最基本的,还有更多的比如紫外截止波长、极性,pKa等很多知识需要掌握。
    加油吧,菜鸟。

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  • xiaogumd11

    第6楼2019/03/25

    应助达人

    样品出现鼓包,很有可能是流动相不合适,或是需要清洗

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  • m3116636

    第7楼2019/03/26

    如何解决鼓包?这个影响正常分析吗?如果出图是否会被客户承认

    检测老菜鸟(v3295053) 发表:你那个其二问题在哪里,你是问这样操作可以不,还是问如何解决鼓包?

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  • m3116636

    第8楼2019/03/26

    只是为了检测纯度,如果确认可以,那我就了解了
    还有一般通用的气相色谱柱可以进酸吗?此次用的色谱柱型号是Agilent 19091M-413:325℃ 3m*320um*0.25um

    检测老菜鸟(v3295053) 发表:其一的那个,气相不能进酸?这个绝对了,跟你的气相色谱柱有关。这个相当于衍生化步骤,如果是检测纯度的,应该可以

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  • m3116636

    第9楼2019/03/26

    综合考虑是怎么个综合考虑法?
    因为方法开发中波长选择也是比较重要的一项,我之前做一个样品,波长210nm 主峰响应值 1500MAU左右,220nm主峰响应值3000左右,纯度后者略高于前者。那么我们如何选择这个波长呢?

    检测老菜鸟(v3295053) 发表:其三那个,要综合考虑波长的选择。

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  • m3116636

    第10楼2019/03/26

    好的~了解啦,刚接触,很多都很懵,看了一下高效液相色谱法的建立,但是这么大一本慢慢看还是很难- -

    检测老菜鸟(v3295053) 发表:其四和其五的问题勒?一个未知分析方法的样品,我们需要知道哪些性质才可以猜测其分析方法,比如沸点,熔点之类的。
    那么我们液相一般通用的分析方法是什么呢?通用分析方法,额,水酸碱甲醇乙腈缓冲盐,基本这些。

    还有,如何选择未知样品的分析是气相还是液相气相做不了的拿液相做,比如易分解,沸点高的。

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