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【求助】不懂就问!求教LC光谱定性的一些问题。

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    2019/04/29
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液相色谱(LC)

  • 液相也差不多一年了,工作时总会遇到定性不准的情况,但是又不能保证每次都能发现,所以想向论坛大佬们请教一下LC定性的问题,主要想学习下PDA的光谱定性功能,还请不吝赐教
    写在前面:考察定性当然还有其他比较好的方式,如重新定位、加标、质谱确认等,但在排除这些方式的情况下,只用光谱定性来辅助判定的话需要如何判断呢?(emmmm好吧 我承认其实就是有点懒
    目前遇到的情况:
    1、样品中有检出,保留时间很好,峰高峰面积还算正常,但是理论上来讲不太可能有检出(比如说下图中辣椒粉中检出了苯甲酸国标GB5009.28 国标吸收波长230nm)

    应为有疑问,所以对比了一下样品峰和标品峰的光谱图:

    上图为苯甲酸标品光谱图

    上图为样品峰光谱图
    ⑴这样看的话两幅图差异还是较大,那么这样可以定义为样品峰不是是苯甲酸么?
    ⑵另外想请教下光谱图的关注点应该是全图的峰形还是最大吸收波长的峰形呢?
    2、样品中有检出,保留时间有差异,峰高峰面积还算正常,但是理论上来讲可能有检出(比如说下图中辣条中检出了山梨酸国标GB5009.28 国标吸收波长230nm)

    15分钟左右,蓝色峰的位置,样品峰和定位有差异,但是仪器可以识别并且达到检出限(辣条不能检出)
    对照光谱图:

    上图为样品峰光谱图

    上图为标品峰光谱图
    这种定位有差异,光谱图差异也比较明显的,是否可以认为该检出物不是山梨酸?
    3、样品未检出,但是在标品峰旁边有一个临近峰,峰高峰面积较大,但是保留时间差异较大。(比如说下图中出现了临近峰 国标GB5009.28 国标吸收波长230nm)

    图中已选中的峰与旁边的苯甲酸标品定位峰差了1min,峰形峰高峰面积都很正常。
    对比峰的光谱图

    上图为苯甲酸标品峰的光谱图

    上图为样品峰的光谱图
    ⑴两张图基本相似,那这种情况下可否认为是该样品峰就是苯甲酸的检出峰,只不过因为某种原因位移了?
    ⑵顺便还想请教下,一般来说峰的保留时间变动在只考虑室温的情况下在多少min内是正常的呢?(按24h的任务序列作为限制的话)
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  • 检测老菜鸟

    第1楼2019/04/29

    应助达人

    坐等。

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  • hujiangtao

    第2楼2019/04/29

    应助达人

    感觉PDA也知识起辅助作用吧 除非标样和样品紫外吸收三维谱图差太多

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  • 我是风儿

    第3楼2019/04/29

    应助达人

    两个都不是的,PDA定性看的是峰谷(尤其是最大峰高处)的吸收波长的,参考最大吸收波长不得超过2nm.

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    第4楼2019/04/29

    1、 我总共发了3组图 您的意思是三组图的结果都是检出物不是目标物么?
    2、这个不得超过2nm的要求请问有具体的说法或者文献么? 想学习下,因为我的标品跑出来他最大吸收只有223 和国标要求相差了7nm,或者您的意思是说标样最大吸收和目标吸收波长不得超过2nm?

    我是风儿(nphfm2009) 发表:两个都不是的,PDA定性看的是峰谷(尤其是最大峰高处)的吸收波长的,参考最大吸收波长不得超过2nm.

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    第5楼2019/04/29

    第三组图光谱图非常相似,但是最大吸收波长相差3nm,这种是判定为不是目标物么?

    我是风儿(nphfm2009) 发表:两个都不是的,PDA定性看的是峰谷(尤其是最大峰高处)的吸收波长的,参考最大吸收波长不得超过2nm.

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    第6楼2019/04/29

    所以就想问问第1组图判定为未检出和第3组图的判定为检出是否正确。
    当然稳妥点还是加标比较合适就是了

    hujiangtao(hujiangtao) 发表:感觉PDA也知识起辅助作用吧 除非标样和样品紫外吸收三维谱图差太多

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  • 我是风儿

    第7楼2019/04/29

    应助达人

    有的,我上传图片给你看:
    如果具体物质没有特别规定的,就参照这个,个别具体物质有特别规定的,就按照它的规定进行:比如叶酸这个物质是这样规定的:照紫外-可见分光光度法(通则 0401)测定,在256nm、283nm与365nm ±4nm的波长处有最大吸收,在 256nm与365nm波长处的吸光度比值应为2.8~3.0。
    我给你查了下,苯甲酸,山梨酸没有特别的规定 ,所以就按一般规定,不超过+、-2nm

    账号已失效(Ins_dddbfae3)发表:1、 我总共发了3组图 您的意思是三组图的结果都是检出物不是目标物么?
    2、这个不得超过2nm的要求请问有具体的说法或者文献么? 想学习下,因为我的标品跑出来他最大吸收只有223 和国标要求相差了7nm,或者您的意思是说标样最大吸收和目标吸收波长不得超过2nm?

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  • 我是风儿

    第8楼2019/04/29

    应助达人

    三组图的结果都是检出物不是目标物么?是的,
    意思是说标样最大吸收和目标吸收波长不得超过2nm?是的

    我是风儿(nphfm2009)发表:有的,我上传图片给你看:
    如果具体物质没有特别规定的,就参照这个,个别具体物质有特别规定的,就按照它的规定进行:比如叶酸这个物质是这样规定的:照紫外-可见分光光度法(通则 0401)测定,在256nm、283nm与365nm ±4nm的波长处有最大吸收,在 256nm与365nm波长处的吸光度比值应为2.8~3.0。
    我给你查了下,苯甲酸,山梨酸没有特别的规定 ,所以就按一般规定,不超过+、-2nm

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  • 我是风儿

    第9楼2019/04/29

    应助达人

    我看了你的第三张图,标品为223nm,样品为226nm,不放心,可以改变流动相中甲醇的比例试下他们的出峰时间是否相近

    账号已失效(Ins_dddbfae3)发表: 所以就想问问第1组图判定为未检出和第3组图的判定为检出是否正确。
    当然稳妥点还是加标比较合适就是了

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  • 账号已失效

    第10楼2019/04/29

    嗯 我直接做了个加标 看看跑出来结果如何

    我是风儿(nphfm2009) 发表:我看了你的第三张图,标品为223nm,样品为226nm,不放心,可以改变流动相中甲醇的比例试下他们的出峰时间是否相近

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