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液相色谱法检测样品中杀铃脲的含量

夏沫

2019/07/25
恒心永谱

液相色谱（LC）

今天接到客户送来的样品，让我们检测一下样品中是否含有杀铃脲，如果含有含量是多少？老规矩先要了解一下杀铃脲，它是一种接触性和胃毒性杀虫剂，属于苯甲酰脲类的昆虫生长调节剂，阻止了昆虫体内合成，使昆虫幼虫虫体畸形而死亡。主要用来防治玉米、棉花、森林、水果和大豆上的鞘翅目、双翅目、鳞翅目害虫，对此类害虫的天敌却无害。此种杀虫药属于低毒杀虫剂，并且效率高，对大多数动物和人无毒害作用，从而被广泛使用。
本次试验将试样用二甲基甲酰胺溶解，通过液相色谱仪，以C18柱为固定相，甲醇+水为流动相，将有效成分与杂质分开，在波长为254nm下，用紫外检测器，数据处理系统，测定流出峰面积，用外标法，定量有效成分的质量分数。老套路来了先来看看我们的实验试剂：
杀铃脲标准品：已知质量分数为97%；
N,N—二甲基甲酰胺：分析纯；
水：新蒸二次蒸馏水；
甲醇：色谱纯。
接着实验仪器：
高效液相色谱仪：具有 254nm 波长紫外检测器

色谱柱：C18不锈钢柱

微量注射器：50μl。

流动相过滤器

电子天平

超声波清洗器

我们实验的色谱条件：
流动相：甲醇：水 ﹦80：20
流量：1.0ml/min
检测波长：254nm
进样体积：20μl
开动我的小手开始样品前处理：
轻车熟路的配置好我的流动相：将甲醇和水按8：2比例混合，经过流动相过滤器过滤后，转移至棕色瓶中，超声后备用。流动相到位后我们先给老伙计换上新配的流动相，然后把我们的老伙计启动起来，待仪器自检过后设定好流速和波长后来排气泡，气泡排除完毕，接下来就等待基线稳定了，趁着这个时间我们来处理样品啦。
小心翼翼的开始配置标准品溶液：称取杀铃脲标准品5mg（精确至 0.0002g）于10ml容量瓶中，加入约4ml二甲基甲酰胺溶解，在超声中脱气10min，定容后摇匀。二甲基甲酰胺属于中等毒性物质，可通过呼吸和皮肤接触导致中毒，使用过程中要带手套和口罩。大家配制试剂时要注意试剂瓶上的提示！有毒、有腐蚀性、易挥发的试剂，使用完后第一时间盖好盖子，放置到安全位置。配好后的试剂要写好名字和浓度，以免不必要的错误。
样品溶液：称取样品100mg（精确至 0.0002g）于10ml 容量瓶中，加入约4ml 二甲基甲酰胺溶解，超声脱气、过滤一样不可少。超声波中脱气 10min，定容后摇匀，用0.5μm孔径过滤器过滤，待测。
万事俱备开始测定测定：
仪器基线已经平稳，使用进样针手动进样一针标准品后，我的天呀！峰怎么变成这个样子啦：

溶剂跟标准品的峰都这么高，而且都平头了，这标品浓度有点高呀，超出检测器范围啦，稀释了五倍后又进了一针，峰又是这个样子啦，

溶剂咋这么顽固呢，咋还这么高呢，不行我的看看这溶剂咋回事，单独进了一针溶剂，我滴个乖乖，还是那样子，

仔细一想稀释的是标准品浓度，用溶剂稀释的，溶剂怎么会降下来吗？出峰时间都对，也没影响标准品的峰，先不管他了。接着连续进了三针标准品，标准品峰面积变化相差小于0.5%，随后准备开始进样品了，样品谱图一出来我又懵了，

这咋还这么点呢，出峰时间没问题呀，问题是不仔细找，我还真看不到他了，毫无疑问跟标品相反浓度太低了，重新称取了100mg样品三分，分别加入了1mL、2mL、5mL的二甲基甲酰胺，先进一针5mL的，

峰好像还不错，但是还是有一点点小又进了一针，再进一针2mL的看看，

峰是挺大了但分离的不太好呀，1mL的肯定也分离不好，但是也进一针看看情况吧，

果然不出我所料。确定好浓度了，让仪器稳定一下后进一针标品，再进两针样品，再进一针标品，完成测定。（确定浓度时每个浓度进两针，这给我折腾一天，闷热和烦躁使我奔溃，一看最后测定的谱图，哎呀呀，虽然外面电闪雷鸣，但是我这心里呀阳光明媚呀！）
测定和结束后结果及讨论
将测得的两针样品溶液以及样品前后两针标准品溶液的峰面积，分别进行平均，按照下式进行计算：

C样：样品浓度
C标：标准品浓度
A样：样品平均峰面积
A标：标准品平均峰面积

根据谱图判定样品中含有杀铃脲，计算出样品中杀铃脲的含量为：4mg/100mL。
在此次检测中我第一次遇到标品峰高到出现平峰，但是得到老大指导很快完美解决了，但是溶剂峰确实令我头疼，单进溶剂也是那么高，我就在网上查询答案五花八门，但是仪器没有故障标品峰也对，终于在仪器信息网上看到了答案，那溶剂峰这样不影响样品检测，我们就不用太去纠结他。最后检测完仪器收尾也很重要哦，不要忘记冲洗系统和进样阀哦！在仪器冲洗时间段把实验废液和剩余试剂处理掉，避免他人不小心接触到有毒、有腐蚀性的实验废液，给大家带了不必要的危害。记得检验农残要使用的专用器皿哦，不要和别的器皿混用，以免污染别的器皿。冲洗系统结束后关闭好电源哦！

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moviehua

第1楼2019/07/25

应助工程师

赞一个，很不错！

0

有水有渝

第2楼2019/07/26

应助达人

如果是外标法，对照品峰面积与样品峰面积差得还是有点大，建议把对照品稀释到接近样品的峰面积，这样定量更准确

0

zyl3367898

第3楼2019/08/03

应助达人

为何是平头峰。

0

小不董

第4楼2019/08/04

应助达人

流动相用甲醇，为啥样品需要用DMF来溶解呢？这农药更易溶解在DMF中？
DMF的信号是很高的

0

小不董

第5楼2019/08/06

应助达人

为啥这柱子是选择上进下出的方式呢？

0

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