HPLC法测定黄芪水提物中的毛蕊异黄酮苷含量
黄芪中的主要有效成分除皂苷外就是异黄酮类化合物。异黄酮类成分具有调节免疫、抗肿瘤、抗突变、抗氧化、抗炎、抗突变抗辐射、抗心肌缺血、抗心律失常、抗病毒、抗细胞凋亡、保肝、防止动脉粥样硬化等作用,其代表成分就是毛蕊异黄酮 7-O-β-D 吡喃葡萄糖苷(即毛蕊异黄酮苷)。2010版药典才开始将毛蕊异黄酮苷收录为黄芪中有效成分含量测定项。本章实验借鉴药典中的测定方法,对不同工艺条件下获得的黄芪水提物中的毛蕊异黄酮苷含量进行考察,以期为优化芪龙胶囊和黄芪配方颗粒中黄芪的提取工艺参数提供科学基础和理论依据。图4-1 毛蕊异黄酮苷对照品色谱图
图4-2 黄芪水提物样品色谱图
图4-3 毛蕊异黄酮苷标准曲线
表4-1 毛蕊异黄酮苷加样回收率测定结果
样号 | 样品中的量/mg | 加入量 /mg | 测得量/mg | 回收率 /% | 平均值/% | RSD /% |
1 | 1.06 | 0.52 | 1.64 | 111.54 | 108.85 | 2.9 |
2 | 1.06 | 0.52 | 1.64 | 112.08 | ||
3 | 1.06 | 1.06 | 2.22 | 109.20 | ||
4 | 1.06 | 1.06 | 2.24 | 111.02 | ||
5 | 1.06 | 1.59 | 2.72 | 104.57 | ||
6 | 1.06 | 1.59 | 2.72 | 104.67 |
表4-2 9组黄芪水提物中毛蕊异黄酮苷含量测定结果
批号 | 峰面积 | 含量(mg/g) |
1 | 1123989.50 | 0.53 |
2 | 2707047.50 | 1.31 |
3 | 1947171.50 | 0.93 |
4 | 3573103.75 | 1.73 |
5 | 1824562.00 | 0.87 |
6 | 2767419.00 | 1.34 |
7 | 2077551.50 | 1.00 |
8 | 1677225.50 | 0.80 |
9 | 1725416.00 | 0.83 |
表4-3水提实验因素水平表
水平 | 因素 | ||
A(用水量/倍) | B(提取时间/h) | C(提取次数/次) | |
1 | 4 | 1 | 1 |
2 | 8 | 2 | 2 |
3 | 10 | 3 | 3 |
表4-4 毛蕊异黄酮苷转移率考察L9(34)正交试验表
批号 | A | B | C | D | 毛蕊异黄酮苷 转移率/% |
1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 37.21 |
2 | 1 | 2 | 2 | 2 | 91.77 |
3 | 1 | 3 | 3 | 3 | 65.58 |
4 | 2 | 1 | 2 | 3 | 121.62 |
5 | 2 | 2 | 3 | 1 | 61.36 |
6 | 2 | 3 | 1 | 2 | 93.85 |
7 | 3 | 1 | 3 | 2 | 70.08 |
8 | 3 | 2 | 1 | 3 | 56.28 |
9 | 3 | 3 | 2 | 1 | 57.94 |
K1 | 194.56 | 228.91 | 187.34 | 156.51 |
|
K2 | 276.83 | 209.41 | 271.33 | 255.70 |
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K3 | 184.30 | 217.37 | 197.02 | 243.48 |
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优水平 | 2 | 1 | 2 | 2 |
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R | 92.53 | 19.50 | 83.99 | 99.19 |
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表4-5 毛蕊异黄酮苷转移率考察方差分析表
方差来源 | 离差平方和 | 自由度 | F | 显著性 |
A | 1715.05 | 2 | 1.50 | - |
B | 64.09 | 2 | 0.04 | - |
C | 1407.78 | 2 | 1.13 | - |
方差来源 | 离差平方和 | 自由度 | F | 显著性 |
D | 1950.20 | 2 | - | - |
表4-6 综合评分计算L9(34)正交试验表
试验号 | A | B | C | D | 黄芪甲苷 | 毛蕊异黄酮苷转移率/% | 出膏率/% | 综合评分 |
1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 34.12 | 37.21 | 20.38 | 32.61 |
2 | 1 | 2 | 2 | 2 | 51.54 | 91.77 | 30.19 | 63.36 |
3 | 1 | 3 | 3 | 3 | 89.41 | 65.58 | 39.46 | 69.89 |
4 | 2 | 1 | 2 | 3 | 268.30 | 121.62 | 35.47 | 163.06 |
5 | 2 | 2 | 3 | 1 | 92.88 | 61.36 | 34.29 | 68.55 |
6 | 2 | 3 | 1 | 2 | 56.56 | 93.85 | 28.74 | 65.91 |
7 | 3 | 1 | 3 | 2 | 99.83 | 70.08 | 28.49 | 73.66 |
8 | 3 | 2 | 1 | 3 | 65.10 | 56.28 | 31.40 | 54.83 |
9 | 3 | 3 | 2 | 1 | 77.56 | 57.94 | 38.20 | 61.84 |
K1 | 165.86 | 269.33 | 153.35 | 163.00 |
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K2 | 297.52 | 186.74 | 264.62 | 202.93 |
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K3 | 190.33 | 197.64 | 212.10 | 287.25 |
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优水平 | 2 | 1 | 2 | 3 |
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R | 131.66 | 82.59 | 111.27 | 124.25 |
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表4-7 综合评分计算方差分析表
方差来源 | 离差平方和 | 自由度 | F | 显著性 |
A | 3269.20 | 2 | 1.38 | - |
B | 1342.15 | 2 | 0.45 | - |
C | 3050.29 | 2 | 1.25 | - |
D | 2707.11 | 2 | - | - |
参考文献