十个技巧帮你迅速提高化合物在液质中的响应

歪果仁zZ

2019/10/10
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液质联用（LCMS）

十个技巧帮你迅速提高化合物在液质中的响应

1、成熟规范的样品制备方法是整个LC-MS分析的重要前提。样品预处理各步不能随意省略，如萃取、分离、去盐等。某些化合物必须化学衍生化以适应LC-MS 要求，如磷酸酯水解。若MS信号实在太低，应考虑换另外的样品处理方法。浓度非常低的样品不能保存太长时间，容器吸附、药物自身分解等原因会使样品浓度降低，标准品工作液现配现做。
2、离子化方式需要根据样品的性质而确定:适合ESI(IS)：高极性化合物以及大分子，蛋白质、肽类、低聚核苷酸等生物分子；胺类、季铵盐等；含杂原子化合物如氨基甲酸酯等。适合APCI（HN）：弱极性/中等极性的小分子，如脂肪酸，邻苯二甲酸等；含杂原子化合物如氨基甲酸酯、脲等，适合。碱性化合物宜用正离子方式，酸性化合物宜用负离子方式，如未知，可能正负都要做，有些化合物正负都出峰，选择灵敏度高的方式，不明确的优先用正离子方式试。
3、根据化合物类型选择流动相组成，甲醇-水，乙腈-水或甲醇-乙腈-水，某些化合物只有某种流动相体系才出峰。一般正离子方式用甲醇，负离子方式用乙腈好些，通常有机相比例高些好。梯度的设定：梯度变化太快对离子化效率影响很大，相应源参数也应该改变，如恒定比例流动相能满足分离要求时，尽量不用梯度，尤其定量分析时。流动相中加入甲酸、乙酸铵等可提高正离子化效率，但是否加酸不是绝对的，还要根据LC的分离情况，样品在酸性条件下的稳定性等决定。通常PH值低些+比率高， PH值高些+ 、 +或 +比率高。
4、溶解样品的溶剂：用流动相或甲醇、乙腈溶比用含水多的溶剂LC峰系形好。如果常用的流动相不能很好溶解样品，可用少量特殊溶剂先将样品溶解后再用流动相稀释。LC流量在色谱柱和MS允许情况下适当可以压缩峰宽，使峰强度提高。当只有粗色谱柱，只能大流量时可采用三通分流，以适应MS的流量要求。选细色谱柱，如内径2mm，进样量可以小，提高相对浓度，离子化效率，灵敏度。换长一些的色谱柱，对定性分离效果好，但分析时间延长，如峰形仍不理想，可考虑另选其他型号色谱柱。柱后补偿：当不得不用高浓度TFA时，常用异丙醇，解决信号抑制问题。柱后衍生化，增加离子化。
5、仪器参数的优化：CAL先校准，用PPG或一已知化合物检验，如偏差不大，可以不用做质量校准，但偏高偏低要心中有数。先用浓度大约0.1-1ppm的标样，通过syringe pump，以5-10ul/min优化COMPOUND项下面的参数，如DP，CE，EP，CXP及CAD等。顺序：Q1 SCAN- PRODUCTION SCAN - MRM 。不同化合物参数有可能差别很大。再接通LC用FIA优化其他参数及源位置，或接一个三通，样品仍由注射泵进入离子源，同时LC保持需要的流量，优化温度和GAS1及2，CXP，CAD，EP优化后通常不用再改，在保证充分样品离子化基础上，DP低些使母离子丰度提高，总灵敏度相应提高。
6、仪器参数的优化：质量范围不要太宽，涵盖待测离子再增加20-30AMU即可。采样时间适当长些噪声低，当同时检测数十对离子时，MRM采样时间可以数十毫秒.同时检测数对离子时，可100-200毫秒。母、子离子输入的质量数值要选准,要根据Q1 SCAN及PRODUCTIONSCAN得到的结果输入，不能只是整数。当不能确定精确质量数时，可选待测质量数上下各0.1AMU，同时数对离子优化，最终找出灵敏度最佳的一对离子。例如321.0-152.0，321.1-152.0，320.9-151.9。若样品较杂，同一化合物要选择几对母、子离子，经进样实验找出哪对有干扰，去掉，保留不易受干扰的1-2对离子。
7、根据LC流量和流动相组成确定温度和GAS1及GAS2，当流量大，水相多时，温度及气流要大。离子源喷雾位置是根据LC流量调节的，基本上流量固定位置就固定。调节喷雾电压，但太高有可能放电。调节Q1及Q3分辨率。许多源参数互相影响，需要反复细调, 使信噪比得以改善。
8、做完含生物体液样品后，LC需多冲些时间，使吸附到色谱柱上的干扰物完全洗脱下来。
若本底高，清洗离子源喷雾针管和oriface，喷雾针可拆下超声清洗，oriface要用无毛纸沾溶剂擦。清洗管路，可从源上拆下PEEK，或将源从仪器上取下，用SYRINGE PUMP洗，换不同溶剂，极性、非极性、酸等轮番冲洗，最后甲醇/水。
9、用过含酸的流动相后，色谱柱，离子源都要用甲醇/水冲，延长仪器寿命。做完MRM后，用手动使仪器处于Q1 SCAN，降温，停大流量LC，最后关气，但管路中最好有些水，不要完全干。
10、纯标样分析时，母、子离子的分辨率可都选LOW，S/N提高一倍，而噪声并不增高，若复杂混合物，有基质干扰则不宜选LOW。适当加大进样量可提高响应。也可以采用浓缩样品，测定后再推算回原始浓度。分析后的谱图平滑后可提高信噪比，可多次平滑。当化合物很稳定不易产生碎片，可考虑采用Ar、Xe等原子量较大的气体，以增加碰撞能量。
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