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十个技巧帮你迅速提高化合物在液质中的响应

  • 歪果仁zZ
    2019/10/10
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液质联用(LCMS)

  • 十个技巧帮你迅速提高化合物在液质中的响应



    1、成熟规范的样品制备方法是整个LC-MS分析的重要前提。样品预处理各步不能随意省略,如萃取、分离、去盐等。某些化合物必须化学衍生化以适应LC-MS 要求,如磷酸酯水解。若MS信号实在太低,应考虑换另外的样品处理方法。浓度非常低的样品不能保存太长时间,容器吸附、药物自身分解等原因会使样品浓度降低,标准品工作液现配现做。
    2、离子化方式需要根据样品的性质而确定:适合ESI(IS):高极性化合物以及大分子,蛋白质、肽类、低聚核苷酸等生物分子;胺类、季铵盐等;含杂原子化合物如氨基甲酸酯等。适合APCI(HN):弱极性/中等极性的小分子,如脂肪酸,邻苯二甲酸等;含杂原子化合物如氨基甲酸酯、脲等,适合。碱性化合物宜用正离子方式,酸性化合物宜用负离子方式,如未知,可能正负都要做,有些化合物正负都出峰,选择灵敏度高的方式,不明确的优先用正离子方式试。
    3、根据化合物类型选择流动相组成,甲醇-水,乙腈-水或甲醇-乙腈-水,某些化合物只有某种流动相体系才出峰。一般正离子方式用甲醇,负离子方式用乙腈好些,通常有机相比例高些好。梯度的设定:梯度变化太快对离子化效率影响很大,相应源参数也应该改变,如恒定比例流动相能满足分离要求时,尽量不用梯度,尤其定量分析时。流动相中加入甲酸、乙酸铵等可提高正离子化效率,但是否加酸不是绝对的,还要根据LC的分离情况,样品在酸性条件下的稳定性等决定。通常PH值低些+比率高, PH值高些+ 、 +或 +比率高。
    4、溶解样品的溶剂:用流动相或甲醇、乙腈溶比用含水多的溶剂LC峰系形好。如果常用的流动相不能很好溶解样品,可用少量特殊溶剂先将样品溶解后再用流动相稀释。LC流量在色谱柱和MS允许情况下适当可以压缩峰宽,使峰强度提高。当只有粗色谱柱,只能大流量时可采用三通分流,以适应MS的流量要求。选细色谱柱,如内径2mm,进样量可以小,提高相对浓度,离子化效率,灵敏度。换长一些的色谱柱,对定性分离效果好,但分析时间延长,如峰形仍不理想,可考虑另选其他型号色谱柱。柱后补偿:当不得不用高浓度TFA时,常用异丙醇,解决信号抑制问题。柱后衍生化,增加离子化。
    5、仪器参数的优化:CAL先校准,用PPG或一已知化合物检验,如偏差不大,可以不用做质量校准,但偏高偏低要心中有数。先用浓度大约0.1-1ppm的标样,通过syringe pump,以5-10ul/min优化COMPOUND项下面的参数,如DP,CE,EP,CXP及CAD等。顺序:Q1 SCAN- PRODUCTION SCAN - MRM 。不同化合物参数有可能差别很大。再接通LC用FIA优化其他参数及源位置, 或接一个三通,样品仍由注射泵进入离子源,同时LC保持需要的流量,优化温度和GAS1及2,CXP,CAD,EP优化后通常不用再改,在保证充分样品离子化基础上,DP低些使母离子丰度提高,总灵敏度相应提高。
    6、仪器参数的优化:质量范围不要太宽,涵盖待测离子再增加20-30AMU即可。采样时间适当长些噪声低,当同时检测数十对离子时,MRM采样时间可以数十毫秒.同时检测数对离子时,可100-200毫秒。母、子离子输入的质量数值要选准,要根据Q1 SCAN及PRODUCTIONSCAN得到的结果输入,不能只是整数。当不能确定精确质量数时,可选待测质量数上下各0.1AMU,同时数对离子优化,最终找出灵敏度最佳的一对离子。例如321.0-152.0,321.1-152.0,320.9-151.9。若样品较杂,同一化合物要选择几对母、子离子,经进样实验找出哪对有干扰,去掉,保留不易受干扰的1-2对离子。
    7、根据LC流量和流动相组成确定温度和GAS1及GAS2,当流量大,水相多时,温度及气流要大。离子源喷雾位置是根据LC流量调节的,基本上流量固定位置就固定。调节喷雾电压,但太高有可能放电。调节Q1及Q3分辨率。许多源参数互相影响,需要反复细调, 使信噪比得以改善。
    8、做完含生物体液样品后,LC需多冲些时间,使吸附到色谱柱上的干扰物完全洗脱下来。
    若本底高,清洗离子源喷雾针管和oriface,喷雾针可拆下超声清洗,oriface要用无毛纸沾溶剂擦 。清洗管路,可从源上拆下PEEK,或将源从仪器上取下,用SYRINGE PUMP洗,换不同溶剂,极性、非极性、酸等轮番冲洗,最后甲醇/水。
    9、用过含酸的流动相后,色谱柱,离子源都要用甲醇/水冲,延长仪器寿命。做完MRM后,用手动使仪器处于Q1 SCAN,降温,停大流量LC,最后关气,但管路中最好有些水,不要完全干。
    10、纯标样分析时,母、子离子的分辨率可都选LOW,S/N提高一倍,而噪声并不增高,若复杂混合物,有基质干扰则不宜选LOW。适当加大进样量可提高响应。也可以采用浓缩样品,测定后再推算回原始浓度。分析后的谱图平滑后可提高信噪比,可多次平滑。当化合物很稳定不易产生碎片,可考虑采用Ar、Xe等原子量较大的气体,以增加碰撞能量。
    今天的分享到此结束,感谢仪器信息网提供原创大赛平台让大家互相学习!
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  • Insm_288ad8cc

    第1楼2019/10/17

    不错,收藏学习了。

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  • 歪果仁zZ

    第2楼2019/10/17

    应助达人

    互相学习!

    Insm_288ad8cc(Insm_288ad8cc) 发表:不错,收藏学习了。

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