如何解决液质异常出峰实例

如何解决液质异常出峰实例

液质利用在摸索方法时尽可能会缩短时间，以保证色谱峰更好的重现性和稳定性。而在追求短时间高效率的色谱方法时，难免出现各种“鬼峰”的出现。那么当出现异常色谱峰时该如何处理应对呢？今天我们为大家以实际例子分享正确的处理过程和检查步骤。

我们今天分析的样品是糖类物质，其选用的色谱柱为资生堂PC HILIC柱，而其资生堂色谱柱与飞诺美HILIC色谱柱的使用比较我也写了一篇分享。一周前开发的方法，目标物稳定在2.5分钟出峰，而本周重新接上色谱柱却发现第一针如下图：色谱峰依然在2.5 分钟出峰，有些离子对峰形较差，可删掉因为我们针对每一个分析物都设置了3对离子对。此时初始流动相10%水。

而当我们进第二针、第三、第四针却发现此时在1分钟出现异常峰。如下图。此时1分钟的色谱峰和2.5分钟的色谱峰峰高相加几乎等于第一针2.5分钟的色谱峰峰高。那么问题来了，为什么会在1分钟出现鬼峰呢？

我们开始逐一排查鬼峰出现的原因：

首先怀疑是否存在柱前污染，导致此种现象发生。那么检验方法就是进一针空白样品，在保证空白样品没有被污染的前提下，我们发现结果并没有在1分钟出峰。那么柱前污染的因素被排除了。

第二我们怀疑是流动相中的高盐析出，导致ph变化，从而对分析物的存在状态产生了影响。那么我们抓紧将流动相取下超声，在保证没有发现底部盐粒的情况下，充分purge色谱泵，充分平衡色谱柱，进样。结果却依然不尽人意，1分钟仍然出峰。

第三此时我们回忆起上周末重新配置的乙酸铵浓溶液，不会是配置盐的母液时计算出现了问题？我们抓紧重新配置盐的母液。在保证流动相中没有发现底部盐粒的情况下，充分purge色谱泵，充分平衡色谱柱，进样。结果却依然不尽人意，1分钟仍然出峰。

第四，那么色谱泵和流动相都不存在问题，那是在色谱柱中出现的问题了。此时我们仔细观察压力变化。此时流动相梯度：0-1.5min，10%水相；1.5-1.6min，10-60%水相；1.6-3.5min，60%水相；3.5-3.6min，60-10%水相；3.6-6min，10%水相。正常色谱泵的压力应为初始1200psi，随着水相的增加，压力增高，后随着水相减小，压力也减小。但我们此时发现在6分钟时，压力仍居高不下，那么为什么只有在进样针移出时压力才会降低呢？

原因就在于虽然我们设置的是0.1分钟迅速将流动相由60%水相减少为10%水相，但色谱泵需要一个缓冲的过程，这个过程不会按照设定的0.1分钟而进行。即使安捷伦的色谱泵出现这种情况，那么其他厂家的色谱泵我认为也有类似情况。那么问题找到了，我们将分析时间延长至7.5分钟。同时也改变了初试流动相为5%水相，将色谱峰时间维持在中间时间。色谱峰稳定在2.5分钟出峰。如下图。问题迎刃而解。

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