关于大孔树脂分离纯化的问题，请大神指教！

应助达人

装柱量2/3应该是树脂高度，不包括水，树脂上方一般是需要留1cm高度液体的，不能干，装入一层滤纸的作用有两个，一个是过滤作用，去除杂质，另外一个作用是缓冲作用，防止你上样的时候树脂被冲起

好的，十分感谢！

还想请教您一下，这个上样的提取液是规定不能含有醇吗？

应助达人

可以采用醇类的提取液过柱，有条件的话有可以将初级的提取液浓缩后再过柱。

纯化的关键是过柱的吸收效率和洗脱的速率（含梯度）。

你采用什么溶剂来洗脱？

应助达人

Q1：首先把新买的树脂进行预处理：95%乙醇泡24h，用乙醇洗至洗脱液和水混合不浑浊，再用水洗至无醇味。然后用5%盐酸洗，水洗至中性，5%氢氧化钠洗，水洗至中性。（有的文献中没有后面的酸洗和碱洗，请问这个步骤的意义是什么呢？可以省略吗？）
A1：整个过程是活化树脂，酸洗和碱洗不能省略。

Q2：把溶在水里的树脂倒进柱子，敲打柱子，等树脂沉淀后，打开活塞放水，直到距离树脂面1cm关闭活塞。（这一步骤有2个疑问：1.装柱量2/3是指放完水后的树脂占柱子的2/3吗？ 2.有的是留1cm高的水，有的是不留，有的还要放一片滤纸，这个应该怎么弄呢？）
A2：树脂量占柱子的2/3，你的理解没错。大孔树脂要液封（留水）。有些柱子可以不用，但是大孔树脂一定 不能让柱子上面干。滤纸非必须。放滤纸的好处是可以在过柱时候将残渣挡住，便于树脂清洁再次活化使用。

Q3： 按照计算的最大上样量，把提取液倒入柱子内，等液面下降至与树脂快平齐的时候，加入洗脱剂，收集洗脱液。（1.最大上样量是不是就是，洗脱液中黄酮浓度几乎等于进样浓度时的体积？2. 加入洗脱剂的时间，是在提取液的液面下降至与树脂快平齐的时候吗？）
A3：最大上样量通过测试出来的，而且与下端活塞中液体的流速相关（一定程度上流速的越低吸收越好）。主要是测试上提取液时候下端流出的液体中是否含待测组分来确定，装样才能知道是否是最大的上样量。这个参数与层析柱内径，填充树脂，流速等很多因素有关。这里一般要设计各因素或者正好试验。
洗脱液通常是上样后吸收一段时间才去洗脱，这个是需要做当因素试验去确认最佳时间。很少有“加入洗脱剂的时间，是在提取液的液面下降至与树脂快平齐的时候”。

Q4上面已回复。

非常非常非常感谢！

我是用80%乙醇提取的样品，洗脱剂也是用乙醇，我看文献用的较多的是95%乙醇，打算用这个。

我们实验室有旋蒸，可以浓缩，就是量不大，感觉挺麻烦。我不太明白浓缩之后再上样的目的是什么呢？是因为过柱子很慢，前期浓缩之后，会缩短整体纯化时间吗？

考虑过树脂的处理吗？

您是指纯洗酸洗碱洗这些吗？

应助达人

这个是肯定的。

还想请问下如果前期静态吸附曲线实验是5h达到吸附饱和 那后期上样是等5h再加入洗脱剂吗