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食品中蛋白质测定第二法分光光度法测定问题

p3040014

2020/05/16

食品常规理化分析

各位：第一次开展这个实验，GB5009.5-2016中第二法分光光度法测定蛋白质，样品为乳粉，然后第一次做几个试剂空白时候。就是不加标准，加4mL缓冲液+4mL显示剂（甲醛+乙酰丙酮），水浴15mi后，自来水冷却后比色测定，400mn波长，第一个问题就是用其中一个空白调零后测定其他空白，吸光度为0.28-0.37左右，而再次测定调零空白，吸光度为0.28左右，比色液体不浑浊，然后分光光度计没异常，不过是第一次使用400nm波长，以前比较常使用420nm测定水中氨氮，不知道是否仪器还是试剂导致？不知道如何查找原因？而通过文献，有一篇说显示剂应该现配现用，国标说可以稳定3天，我觉得这个应该问题不大，使用分光光度计测定其他项目又正常，无从下手！其中特别现象就是我用空白调零后，取出比色皿，光度计显示0.03吸光度，而使用纯水调零后会显示负值，是仪器问题？还是测定样问题？如何排除？

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hujiangtao

第1楼2020/05/16

应助达人

我觉得蛋白测定还是用定氮仪更好

0

我是风儿

第2楼2020/05/28

应助达人

GB 5009.5-2016分光光度法测定蛋白质原理：

生成的黄色化合物要在20min之内测定稳定，另外你的乙酰丙酮空白要小于0.03才可以使用的，初步怀疑是否是你的乙酰丙酮显色剂有问题，

其中特别现象就是我用空白调零后，取出比色皿，光度计显示0.03吸光度，而使用纯水调零后会显示负值，是仪器问题？还是测定样问题？如何排除？会不会是你们的分光光度计的干燥剂受潮了？光度计怕潮的

0

p3040014

第3楼2020/06/18

我是风儿(nphfm2009) 发表:GB 5009.5-2016分光光度法测定蛋白质原理：

生成的黄色化合物要在20min之内测定稳定，另外你的乙酰丙酮空白要小于0.03才可以使用的，初步怀疑是否是你的乙酰丙酮显色剂有问题，

其中特别现象就是我用空白调零后，取出比色皿，光度计显示0.03吸光度，而使用纯水调零后会显示负值，是仪器问题？还是测定样问题？如何排除？会不会是你们的分光光度计的干燥剂受潮了？光度计怕潮的

我最后直接做曲线，需要每次用空白调零才可以测得，而且不影响测得结果，只是相当于每次不调零吸光度会叠加0.3吸光度，谢谢

0

次元之暗面

第4楼2020/06/27

甲醛-乙酰丙酮必须静置最少1d才能用（5009.5是3d），对调零有疑问的你直接做一个氨氮的质控样来看看就好了

0

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