如何科学做好样品安排及原始记录填写

栀子花开

2020/06/01
解密双螺旋团队

私聊

PCR

如何科学做好样品安排及原始记录填写

0前言

如何科学做好检测样品安排及原始记录填写，做到既方便实验操作，又符合计量认证、兽医实验室考核等的要求，是一个值得探索和讨论的问题。以下内容围绕上述要求展开，如无需求请自行忽略。

1合理安排检测样品

1.1血凝抑制试验

操作：一批样品可以占用一块板或多块板，但不建议多批样品共用一块板；建议阳性对照、阴性对照单独用一块板。

实例：1批禽血清30份，建议占用4块板，最后一块板的最后2行空着。

理由：每批样品均需填写原始记录，如果多批样品共用一块板，在填写原始记录时势必有重叠部分。如果一批样品单独占用一块板或多块板，不和其他样品共用，在处理和阅读原始记录时会更加清晰。同理，一次检测多批样品时，阳性对照、阴性对照是共用的，每批样品的原始记录上均需附上阳性对照、阴性对照的结果。这些对照单独占用一块板，会使原始记录的处理和阅读更加清晰。

1.2 ELISA试验

操作：一块板可以安排一批样品或多批样品，但不建议一批样品占用多块板（一批样品超过一块板的除外）。

实例：5批样品100份（每批20份），建议采用2块板，一块板安排3批样品60份+对照4份，占用8条；一块板安排2批样品40份+对照4份，占用5.5条。多余板条拆下或折断，并用同类型已使用且清洗干净的板条补上，并做好记号（一般在板条上标记×表示非实验板条）。

理由：同上。

1.3荧光定量PCR试验

操作：一块板可以安排一批样品或多批样品，但不建议一批样品占有用多块板；每批样品最好占用一条或多条8联管；待检样品与阳性对照最好能间隔数个孔位。

实例：两批样品40份（每批20份），建议采用6条8联管，第一批样品占用第1条、第2条及第3条前4孔；第二批样品占用第4条、第5条及第6条前4孔；阴性对照放在第6孔第5孔，阳性对照放在第6条最后一孔。

理由：处理和阅读原始记录时会更加清晰，且在一定程度上可以避免加样时的交叉污染。

2做好完整的原始记录

2.1血凝抑制试验

操作：建议对红细胞流淌后的结果进行拍照，并将图片打印后作为原始记录的附件，在手写部分只记录滴度。

理由：既记录最原始的数据（图片也是一种数据），又简化原始记录的手写强度。

部分计量认证评审专家认为，原始记录上应记录最原始的数据，对于血凝抑制试验来说，最原始的数据就是每一孔的凝集程度，也就是几个“+”。我们平时记录的滴度，是在观察每个孔的凝集程度后，综合判定得出的“结果”，是已经经过加工的，不是“原始数据”。对于这一点，很多接受计量认证评审的实验室都叫苦不迭，但评审专家的意见必须遵守。

根据评审准则的规定，原始数据不仅仅包括文字，也可以是图片、音频、视频等电子数据。因此我们可以根据这个规定，将结果用图片的方式进行固定，打印出来后附在手写原始记录后面作为附件，这样手写内容就可以简化为只表述最终滴度。

前面所讲的阳性对照、阴性对照单独占用一块板，道理就在这里。每批样品的图片，和阳性、阴性对照的图片，拼在一起打印出来，才是一份完整的检测“原始数据”。

2.2 ELISA试验

操作：建议将酶标仪读取的数据打印出来后，附在原始记录手写内容后作为附件。读取的数据最好有固定的模板，且含有S/P值（或S/N值）和阴阳性判定结果。这样手写部分可只记录阴阳性判定结果。

理由：(1)原始记录应体现最原始的数据，以便重现检测过程。在ELISA试验中，最原始的数据是酶标仪读取的每一孔的OD值，而S/P值和阴阳性是经过数据处理后的结果而非最原始的数据。根据评审准则的规定，原始记录必须附上每一孔的OD值符合要求。(2)有的实验室在做ELISA原始记录时，但填写样品的OD值，而未填写S/P值。这样做是不严谨的，因为绝大多数ELISA结果，是根据样品S/P值是否大于某个数值或S/N值是否小于某个数值来判定的，原始记录只填写样品OD值，缺少了计算过程，存在瑕疵。

2.3荧光定量PCR试验

操作：建议将荧光定量PCR工作站的检测报告（REPORT）打印出来后，附在原始记录手写内容后作为附件。这样手写部分可只记录阴阳性判定结果（阴性可简写为ND——NotDetected未检出，阳性直接填写Ct值）。

理由：基本同上。荧光定量PCR试验的原始数据并不是Ct值，而是每个循环延伸结束后读取的荧光信号强度。根据评审准则的规定，原始记录必须附上荧光信号强度图谱才符合要求。

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