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小白的LC（液相色谱）之旅——流动相

huanghe007

2020/07/13

私聊

液相色谱（LC）

不知怎么回事，文件一伟上来图不见了。只好图单另上图，格式不会调。将就这样吧

小白的LC（液相色谱）之旅——流动相

有段时间被“发配”搞液相色谱。Agilent的1260infinity设备放置较久。作为小白，没有师傅的情况下，没人可以请教，只能借助仪器信息网搜寻相关学习资料。粗略学习一下，归根到底还是要实践。其中一个问题就是流动相了。原先一直使用的水甲醇流动相。摸索了一下不同比例配比下压力的变化，不同波长检测时峰面积和峰高有何不同。之后发现别人都用的水乙腈流动相。于是又改用水乙腈流动相。再来一遍。发现二者还是有些稍微不同。还是用数据说话。并将一些关键之处及自己的体会心得记录下来。

1. 压力VS不同配比流动相

表1 压力VS不同配比水甲醇流动相

No.	A%	C%	Pressure(bar)
1	0	100	39
2	10	90	60
3	20	80	78
4	30	70	94
5	40	60	106
6	50	50	113
7	60	40	113
8	70	30	106
9	80	20	93
10	90	10	78
11	50	50	113

图1压力VS不同配比水甲醇流动相

表2压力VS不同配比水乙腈流动相

No.	A%	C%	Pressure(bar)
1	50	50	60
2	60	40	67
3	70	30	72
4	80	20	75
5	90	10	74
6	40	60	51
7	30	70	42
8	20	80	35
9	10	90	28
10	0	100	23
11	50	50	56
12	60	40	63
13	70	30	67
14	80	20	70
15	90	10	69
16	50	50	57

图2压力VS不同配比水乙腈流动相

从压力随流动相配比不同而不同，在水甲醇流动相中当水与甲醇各50%时压力达最大。而在水乙腈流动相中当乙腈比例为100%时压力最小。水比例越大压力越大，因流动相不可以全是水。可见乙腈与甲醇的流动阻力不同。为节省试剂，水乙腈流动相取中间各50%的比例。

2.波长的选择

以50：50的配比，温度25℃，流速1.00ml/min，配制某一浓度的样品用于测不同波长的信号。

表3水甲醇流动相的信号VS波长

波长	峰面积	峰高
254	21.83548	1.30979
254	19.87028	2.71641
254	21.24252	2.83819
254	19.92372	2.75292
254	19.20719	2.666
254	19.58259	2.68754
254	19.25777	2.64515
254	20.66354	2.82911
254	19.46472	2.71629
254	19.76038	2.75006
254	18.87213	4.50579
254	19.25948	4.53633
254	19.36697	4.5557
254	19.39382	4.5274
254	19.59477	3.69836
254	19.53112	3.68798
254	19.73312	3.71707
260	35.58664	6.75896
260	35.72891	6.7895
260	35.90482	6.80877
260	36.26693	6.87341
270	66.74742	12.69525
270	67.12888	12.77217
270	68.28195	13.0002
280	44.35106	8.42251
280	44.28596	8.4277
280	43.60561	8.30447
275	64.01466	12.19947
275	63.9854	11.85461
272	68.86501	13.12566
272	69.72466	13.31705
272	70.36848	13.44378
272	68.93624	13.13122
273	67.50188	12.89644
273	67.51179	12.83864
268	64.25979	12.23333
268	64.2391	12.20143
280	44.76415	8.49216
280	44.59446	8.45897
275	63.07079	11.97249
275	64.10613	12.18176

图3水甲醇流动相的信号VS波长

表4水乙腈流动相的信号VS窄波长

波长	峰面积	峰高
272	3.84002	1.02326
272	3.87423
272	3.4	1.5
272	3.279	0.922
272	3.2878	0.92
280	2.455	0.7
280	2.333	0.6588
275	3.029	0.832
275	2.84	0.8
275	2.88	0.803
270	2.77	0.77
270	2.74	0.76
265	2.224	0.601
265	2.1067	0.59
265	2.06	0.55

图4水乙腈流动相的信号VS波长

可以看出两种流动相均在272nm处信号最强。后来发现紫外波长范围太窄，265nm以下也属于紫外区，情况怎样不清楚，又放宽范围。因溶液浓度不同所以未与表4数据合并，单独列于表5并作相应图示。

表5水乙腈流动相的信号VS宽波长

波长	峰面积	峰高
220	234.2	64.20
220	234.8	64.30
220	238.8	64.61
220	234.7	64.40
220	233.9	64.21
220	234.5	64.34
221	227.0	61.41
221	223.3	61.32
221	222.8	61.22
222	211.1	58.03
222	210.7	59.95
223	191.6	52.63
223	191.5	52.63
224	169.8	46.61
224	169.8	46.64
225	155.8	41.68
226	126.9	34.81
228	78.9	21.66
230	49.4	13.51
235	10.6	2.92
240	4.0	1.10
245	5.9	1.60
250	11.5	3.14
252	14.9	4.05
254	19.1	5.24
256	23.4	6.41
260	35.3	9.64
265	53.6	14.70
270	68.2	18.73
272	70.8	19.45
274	68.6	18.89
280	49.4	13.56
220	237.6	64.33
218	249.3	67.52
215	253.6	69.67
212	257.2	69.44
210	245.8	67.59
210	245.4	67.57
211	249.4	68.71
213	253.3	69.72

图5水乙腈流动相的信号VS宽波长

从图5可见在220nm附近信号远强于272nm。因此可以根据样品浓度采用不同的波长。

3.各自测得曲线

总结回顾才发现其实两种流动相所做的曲线点并不合适。因为现在重心转移，没法重新去做。先记在此。

表6水甲醇标准曲线

浓度mg/L	峰面积	峰高
4.09	39.29919	7.32188
4.09	38.58243	7.03954
4.09	39.56756	7.02998
0.2	1.74548	0.150435
0.2	1.84043	0.1615
0.04	0.306	0.066
0.04	0.3026	0.067
0.2	1.859	0.218
0.2	1.7379	0.19204
0.08	0.71052	0.0988
0.08	0.7756	0.0921

图6水甲醇标准曲线

表7水乙腈标准曲线

浓度mg/L	峰面积	峰高
0.0409	0.820302	2.22797
0.0409	0.745984	0.200298
0.0409	0.769751	0.209018
0.409	7.08068	1.95499
0.409	7.09626	1.97114
0.409	7.19623	1.97319
4.09	69.93359	19.31038
4.09	71.09011	19.65752
4.09	71.65461	19.78418

图7水乙腈标准曲线

4.一些应该记住的有用信息

4.1流动相A位瓶一般是水，其它可放有机相。

4.2开机调泵阀时，如果气泡长时间排不尽，可能管道堵塞，考虑换通道。

4.3滤芯不可用超声波清洗，否则超坏。

4.4不能用纯水做流动相。水样是可以进样的。

4.5基线漂移超过1mAu则可能D灯有问题。

4.6进样时要插到底，不拔针，扳到inject后才可取出针。六通阀其中两个废液出口，要与进样口在同一水平高度，避免因虹吸现象出现倒流或者流不出来带走样品。

分
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