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液相色谱-串联质谱条件测定水果中的多农药残留方法优化

我是风儿

2020/09/21
鹤壁农检联合队

私聊

农残检测

本法建立了水果多种农药残留量的快速、简便、准确的测定方法，通过对样品前处理方法、仪器检测方法的考察优化，建立液相色谱-串联质谱检测方法。其中以日本制定的“肯定列表”中的“一律标准”最为严格，限量为 0.01mg/kg，而我国的残留限量标准还不够完善，很多农药还没有制定限量标准，其方法的测定低限（定量限）能达到 0.01mg/kg的要求。

1、液相色谱条件考察：

在方法建立过程中对液相色谱条件进行了考察，主要考察了色谱柱、流动相等。在色谱柱选择时，比较了BEH C18、 HSS T3、 Zorbax Eclipse Plus C18等色谱柱，发现HSS T3色谱柱对甲胺磷、乙酰甲胺磷等大极性农药的色谱保留效果较好，所以选择HSS T3色谱柱进行下一步的研究。在流动相考察时，发现在流动相中加入0.1%的甲酸可以改善多菌灵、噻菌灵等农药的分离，而且加入甲酸可以在电喷雾正离子（ ESI+）模式电离时提供H⁺，提高电离效果，所以选择在流动相中加入0.1%的甲酸，比较了在水相和有机相中均加入0.1%的甲酸、仅在水相中加入0.1%的甲酸两种情况，发现色谱分离及质谱电离无显著差别，为简化操作和便于使用，选择仅在水相中加入0.1%的甲酸。流动相的有机相选择时考察了甲醇、甲醇-乙腈（ 1+1， V/V）、乙腈三种情况，发现采用乙腈时色谱柱的柱压较低，色谱分离也较好，但毒死蜱、辛硫磷、特丁硫磷、敌敌畏等常用有机磷农药的质谱响应值低、重现性差，而选用甲醇时可以显著提高这些化合物的质谱响应及重现性，综合考虑后选择甲醇为流动相的有机相。由于此次分析的多农药的化学性质差别较大，从高极性到低极性均有分布，所以色谱分离时需要采用梯度洗脱模式，通过实验考察，最终确的液相色谱条件如下:

a）色谱柱： HSS T3柱，长100 mm，内径2.1 mm，粒径1.8 μm，或相当者； b) 流动相：甲醇-0.1%甲酸溶液梯度洗脱，参见表 1。

c) 柱温： 35 ºC；d) 进样量： 5.0 μL。

e) 多农药的参考色谱保留时间参见表2。

实验室先通过毛细管直接进样的方式对多农药进行调谐，淘汰了氯氰菊酯、氰戊菊酯、六六六、滴滴涕等4种液相色谱-串联质谱不易电离的农药，在通过液相色谱-串联质谱检测淘汰了甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲基毒死蜱等4种质谱响应值较低和重现性不好的农药，最终确定以下农药（见表2）进行测定，选择的农药均采用电喷雾正离子（ ESI+）模式检测，经过调谐优化确定每种农药的定量离子对、定性离子对、锥孔电压、碰撞能量等参数，最终确定的质谱条件如下

检测方式：MRM多反应监测

Ion Source Type: H-ESI

Positive Ion (V): 4000

Negative Ion (V): 3200

Sheath Gas (Arb): 40

Aux Gas (Arb): 10

Sweep Gas (Arb): 0

Ion Transfer Tube Temp (°C): 350

Vaporizer Temp (°C): 300

Default Charge State: 1

Cycle Time (sec): 0.4

Q1 Resolution (FWHM): 0.7

Q3 Resolution (FWHM): 1.2

CID Gas (mTorr): 1.5

Source Fragmentation: 10

表 2 多农药测定的参考 MRM 条件及色谱参考保留时间

序号	化合物	定量离子对	定性离子对	锥孔电压（ V）		碰撞能量（ eV）	保留时间 min）
1	甲胺磷	142.0/94.0	142.0/124.9	20		15， 12	1.34
2	乙酰甲胺磷	184.0/142.9	184.0/124.9	15		10， 15	1.50
3	多菌灵	192.1/159.9	192.1/132.0	28		18， 25	2.12
4	灭多威	163.0/88.0	163.0/106.0	10		10， 10	2.28
5	噻菌灵	202.1/175.0	202.1/130.9	21		20， 25	2.47
6	吡虫啉	256.1/174.9	256.1/208.9	22		20， 15	2.81
7	吡虫清	222.9/125.8	222.9/89.9	28		25， 30	3.15
8	敌百虫	256.9/108.9	256.9/220.8	20		18， 10	3.20
9	抗蚜威	239.0/72.1	239.4/182.0	25		20， 15	3.36
10	三环唑	189.9/162.8	189.9/135.8	40		20， 25	3.72
11	速灭威	166.0/108.9	166.0/90.9	15		8， 25	4.03
12	敌敌畏	221.0/109.0	221.0/79.1	25		18， 28	4.22
13	残杀威	210.2/110.9	210.2/167.8	15		15， 10	4.29
14	克百威	222.2/164.9	222.2/122.9	20		15， 20	4.33
15	西玛津	202.0/131.9	202.0/123.9		30	20， 20	4.38
16	抑霉唑	297.0/158.8	297.0/254.8		30	20， 18	4.39
17	甲萘威	202.2/145.0	202.2/127.0		15	10， 25	4.58
18	异丙威	194.1/95.0	194.1/137.0		20	15， 8	5.25
19	嘧霉胺	200.2/107.0	200.2/167.9		35	25， 33	5.36
20	莠去津	216.1/173.8	216.1/145.8		30	15， 22	5.37
21	水胺硫磷	290.9/230.9	290.9/120.9		12	10， 30	5.59
22	甲霜灵	280.1/220.0	280.1/192.0		20	13， 17	5.61
23	氧环唑	299.9/158.8	299.9/230.8		30	25， 18	5.66
24	氯吡脲	248.0/128.9	248.0/154.8		26	15， 15	5.72
25	杀扑磷	302.9/144.9	302.9/85.0		17	10， 18	5.97
26	亚胺硫磷	317.9/159.8	317.9/132.9		20	15， 40	6.36
27	嘧菌酯	404.0/372.0	404.0/344.0		25	15， 25	6.88
28	乙霉威	268.1/225.9	268.1/179.8		15	10， 18	6.92
29	扑灭津	230.1/145.9	230.1/187.9		33	24， 18	6.96
30	氟苯嘧啶醇	314.9/251.8	314.9/81.0		35	20， 25	6.97
31	嘧菌环胺	226.1/92.9	226.1/107.9		35	35， 25	7.55
32	多效唑	294.1/70.1	294.1/124.9		20	20， 30	7.68
33	三唑酮	293.9/196.9	293.9/224.9		28	15， 12	7.96
34	腈菌唑	289.1/70.2	289.1/125.1		25	15， 26	7.98
35	三唑醇	296.2/70.1	296.2/99.0		15	15， 13	8.30
36	氯苯嘧啶醇	330.9/268.0	330.9/258.9		35	23， 25	8.36
37	灭线磷	243.2/130.9	243.2/96.8		25	20， 30	8.50
38	除虫脲	311.0/140.9	311.0/113.0		22	33， 50	8.73
39	氟硅唑	316.0/165.0	316.0/247.0		25	25， 18	8.74
40	灭幼脲	309.0/155.9	309.0/138.9		25	18， 30	9.02
41	戊菌唑	284.0/158.9	284.0/172.9		25	25， 20	9.02
42	戊唑醇	308.0/70.0	308.0/124.8		28	20， 28	9.08
43	莎稗磷	367.9/198.9	367.9/170.9		25	15， 20	9.12
44	甲基嘧啶磷	306.1/164.0	306.1/277.8		35	20， 20	9.18
45	丙环唑	342.0/158.8	342.0/204.9		30	30， 18	9.20
46	二嗪磷	305.0/169.0	305.0/153.0		35	20， 20	9.20
47	辛硫磷	299.0/128.9	299.0/96.9		20	15， 15	9.30
48	环氟菌胺	413.0/295.0	413.0/241.0		20	16， 22	9.34
49	四螨嗪	302.9/137.8	302.9/101.9		20	15， 35	9.39
50	异柳磷	346.0/244.8	346.0/216.9		10	10， 20	9.45
51	氟菌唑	346.0/278.0	346.0/205.9		20	10， 30	9.51
52	烯唑醇	325.9/70.1	325.9/158.9		35	25， 30	9.53
53	苯醚甲环唑	406.0/251.0	406.0/188.0		40	25， 45	9.55
54	茚虫威	528.0/149.9	528.0/202.9		30	20， 40	9.57
55	嘧啶磷	333.9/197.8	333.9/169.8		35	22， 35	9.99
56	特丁硫磷	289.0/103.0	289.0/232.9		10	10， 5	10.03
57	乙硫磷	384.9/198.9	384.9/170.8		15	10， 18	10.14
58	毒死蜱	349.9/198.0	349.9/96.9		20	20， 35	10.25
59	噻螨酮	353.0/227.9	353.0/167.9		23	15， 25	10.26
60	氟虫脲	489.0/157.9	489.0/140.9		21	20， 35	10.31
61	哒螨灵	365.0/147.0	365.0/309.0		18	28， 13	10.73

序号	化合物	定量离子对	定性离子对	锥孔电压（ V）		碰撞能量（ eV）	保留时间 min）
1	甲胺磷	142.0/94.0	142.0/124.9	20		15， 12	1.34
2	乙酰甲胺磷	184.0/142.9	184.0/124.9	15		10， 15	1.50
3	多菌灵	192.1/159.9	192.1/132.0	28		18， 25	2.12
4	灭多威	163.0/88.0	163.0/106.0	10		10， 10	2.28
5	噻菌灵	202.1/175.0	202.1/130.9	21		20， 25	2.47
6	吡虫啉	256.1/174.9	256.1/208.9	22		20， 15	2.81
7	吡虫清	222.9/125.8	222.9/89.9	28		25， 30	3.15
8	敌百虫	256.9/108.9	256.9/220.8	20		18， 10	3.20
9	抗蚜威	239.0/72.1	239.4/182.0	25		20， 15	3.36
10	三环唑	189.9/162.8	189.9/135.8	40		20， 25	3.72
11	速灭威	166.0/108.9	166.0/90.9	15		8， 25	4.03
12	敌敌畏	221.0/109.0	221.0/79.1	25		18， 28	4.22
13	残杀威	210.2/110.9	210.2/167.8	15		15， 10	4.29
14	克百威	222.2/164.9	222.2/122.9	20		15， 20	4.33
15	西玛津	202.0/131.9	202.0/123.9		30	20， 20	4.38
16	抑霉唑	297.0/158.8	297.0/254.8		30	20， 18	4.39
17	甲萘威	202.2/145.0	202.2/127.0		15	10， 25	4.58
18	异丙威	194.1/95.0	194.1/137.0		20	15， 8	5.25
19	嘧霉胺	200.2/107.0	200.2/167.9		35	25， 33	5.36
20	莠去津	216.1/173.8	216.1/145.8		30	15， 22	5.37
21	水胺硫磷	290.9/230.9	290.9/120.9		12	10， 30	5.59
22	甲霜灵	280.1/220.0	280.1/192.0		20	13， 17	5.61
23	氧环唑	299.9/158.8	299.9/230.8		30	25， 18	5.66
24	氯吡脲	248.0/128.9	248.0/154.8		26	15， 15	5.72
25	杀扑磷	302.9/144.9	302.9/85.0		17	10， 18	5.97
26	亚胺硫磷	317.9/159.8	317.9/132.9		20	15， 40	6.36
27	嘧菌酯	404.0/372.0	404.0/344.0		25	15， 25	6.88
28	乙霉威	268.1/225.9	268.1/179.8		15	10， 18	6.92
29	扑灭津	230.1/145.9	230.1/187.9		33	24， 18	6.96
30	氟苯嘧啶醇	314.9/251.8	314.9/81.0		35	20， 25	6.97
31	嘧菌环胺	226.1/92.9	226.1/107.9		35	35， 25	7.55
32	多效唑	294.1/70.1	294.1/124.9		20	20， 30	7.68
33	三唑酮	293.9/196.9	293.9/224.9		28	15， 12	7.96
34	腈菌唑	289.1/70.2	289.1/125.1		25	15， 26	7.98
35	三唑醇	296.2/70.1	296.2/99.0		15	15， 13	8.30
36	氯苯嘧啶醇	330.9/268.0	330.9/258.9		35	23， 25	8.36
37	灭线磷	243.2/130.9	243.2/96.8		25	20， 30	8.50
38	除虫脲	311.0/140.9	311.0/113.0		22	33， 50	8.73
39	氟硅唑	316.0/165.0	316.0/247.0		25	25， 18	8.74
40	灭幼脲	309.0/155.9	309.0/138.9		25	18， 30	9.02
41	戊菌唑	284.0/158.9	284.0/172.9		25	25， 20	9.02
42	戊唑醇	308.0/70.0	308.0/124.8		28	20， 28	9.08
43	莎稗磷	367.9/198.9	367.9/170.9		25	15， 20	9.12
44	甲基嘧啶磷	306.1/164.0	306.1/277.8		35	20， 20	9.18
45	丙环唑	342.0/158.8	342.0/204.9		30	30， 18	9.20
46	二嗪磷	305.0/169.0	305.0/153.0		35	20， 20	9.20
47	辛硫磷	299.0/128.9	299.0/96.9		20	15， 15	9.30
48	环氟菌胺	413.0/295.0	413.0/241.0		20	16， 22	9.34
49	四螨嗪	302.9/137.8	302.9/101.9		20	15， 35	9.39
50	异柳磷	346.0/244.8	346.0/216.9		10	10， 20	9.45
51	氟菌唑	346.0/278.0	346.0/205.9		20	10， 30	9.51
52	烯唑醇	325.9/70.1	325.9/158.9		35	25， 30	9.53
53	苯醚甲环唑	406.0/251.0	406.0/188.0		40	25， 45	9.55
54	茚虫威	528.0/149.9	528.0/202.9		30	20， 40	9.57
55	嘧啶磷	333.9/197.8	333.9/169.8		35	22， 35	9.99
56	特丁硫磷	289.0/103.0	289.0/232.9		10	10， 5	10.03
57	乙硫磷	384.9/198.9	384.9/170.8		15	10， 18	10.14
58	毒死蜱	349.9/198.0	349.9/96.9		20	20， 35	10.25
59	噻螨酮	353.0/227.9	353.0/167.9		23	15， 25	10.26
60	氟虫脲	489.0/157.9	489.0/140.9		21	20， 35	10.31
61	哒螨灵	365.0/147.0	365.0/309.0		18	28， 13	10.73

表3 部分农药采用不同定容溶剂时色谱峰形及峰面积

化合物	不同定容溶剂						峰宽（ min）及峰面积
化合物	A	B	C	D	E	F	峰宽（ min）及峰面积
甲胺磷	0.3	0.5(双峰)	0.5（双峰）	0.2	0.2	0.2	峰宽
甲胺磷	4449	5106	942	4585	6342	4590	峰面积
乙酰甲胺磷	0.4	0.6（双峰）	0.4	0.35	0.35	0.35	峰宽
乙酰甲胺磷	116442	147917	54064	133018	130983	148897	峰面积

多菌灵	0.4	0.4	0.4	0.3	0.3	0.3	峰宽
多菌灵	193493	247020	158431	227324	245034	246390	峰面积
氟虫脲	0.6（双峰）	0.4	0.45	0.5（双峰）	0.5	0.35	峰宽
氟虫脲	143	1867	2317	150	341	3189	峰面积
嘧啶磷	0.3	0.3	0.3	0.25	0.25	0.25	峰宽
嘧啶磷	8288444	8932123	9349252	8317623	9155740	9782695	峰面积
乙硫磷	0.6（分叉）	0.35	0.35	0.35（分叉）	0.35	0.3	峰宽
乙硫磷	188	6864	4538	120	888	9372	峰面积
哒螨灵	0.2（分叉）	0.2	0.2	0.2（分叉）	0.2	0.2	峰宽
哒螨灵	18	52455	71546	13	15406	73488	峰面积

在确定液相色谱-串联质谱条件及定容溶剂后，取浓度为 0.05 μg/mL 的混合标准溶液进样测定， 61 种农药的多重反应监测离子流图如图 1 所示

提取净化

样品提取溶剂的选择

首先考察了提取溶剂，由于多菌灵、噻菌灵属于离子型的化合物，在碱性条件下进行液液萃取才能获得好的提取率，我们比较了用纯水、5%磷酸氢二钠缓冲液稀释果汁的效果，以浓缩苹果汁为例，称 2g 用 8mL 纯水稀释后 pH 约 3 ~ 5，称 2 g 用 6 mL5%磷酸氢二钠缓冲液稀释后pH约 5 ~ 6，如果直接进行萃取，则多菌灵、噻菌灵的回收率均只有30 %~50 %，调pH至8 ~ 9后在萃取，则多菌灵、噻菌灵的回收率能达到75 %以上，所以提取中调节 pH 是有必要的，由于纯水不具有 pH 缓冲作用，调节 pH 时不易控制，容易导致pH 过高，使甲胺磷等对强碱比较敏感的农药残留发生分解损失，而 5%磷酸氢二钠缓冲液在 pH8~9时有强的缓冲能力，很容易调到弱碱状态的 pH8~9，可以兼顾离子型化合物和对强碱敏感化合物的提取，所以选择5%的磷酸氢二钠缓冲液进行样品稀释。为了改善液液萃取时的分层效果，在提取液中加入30%的氯化钠，可以保证在采用乙腈萃取时，乙腈与水相能够有效分层。萃取溶剂考察了乙腈、乙酸乙酯、乙腈-乙酸乙酯（ 1+1， V/V），发现乙腈对甲胺磷等极性较大农药的提取回收率稍高，但与其他两种提取液相比，不具有显著差别，但在苹果等水果的提取时可以观察到，采用乙腈萃取时，萃出的色素等杂质较少，而且便于后续的净化，所以最终选择乙腈为萃取溶剂。

3.2.2 固相萃取柱条件的考察

实验中比较了PSA（500mg）、 NH2（500mg）、PSA/Carb（500mg/500mg）、 Carb（500mg）等 4 种固

相萃取柱，取5mL样品萃取液上样（苹果样品），用10mL乙腈洗脱，收集上样流出液及洗脱液，不同萃取柱的回收率如表4 所示。

表4 不同固相萃取柱的加标回收率实验结果

序号	化合物	不同萃取柱的回收率（ %）
		PSA柱	NH2柱	PSA/Carb复合柱	Carb柱

1	甲胺磷	68.5	56.7	55.9	35.9
2	乙酰甲胺磷	65.7	47.3	58.1	45.4
3	多菌灵	90.1	95.7	71.7	79.3
4	灭多威	73.5	68.0	65.9	35.9
5	噻菌灵	85.5	81.2	46.2	77.6
6	吡虫啉	127.9	105.6	83.0	116.0
7	吡虫清	123.9	80.9	123.9	106.2
8	敌百虫	73.2	84.6	65.0	48.5
9	抗蚜威	111.6	98.0	100.4	85.5
10	三环唑	105.6	71.1	115.8	103.5
11	速灭威	88.0	89.3	86.7	79.1
12	敌敌畏	99.8	89.5	57.6	86.2
13	残杀威	110.1	53.7	109.0	56.2
14	克百威	71.3	62.0	74.8	83.8
15	西玛津	114.1	109.5	117.7	110.3
16	抑霉唑	89.0	86.8	77.0	97.7
17	甲萘威	67.5	80.9	59.6	115.2
18	异丙威	89.8	88.2	76.2	90.2
19	嘧霉胺	124.3	52.2	139.6	124.2
20	莠去津	114.0	88.9	104.8	116.9
21	水胺硫磷	89.3	93.4	83.6	72.7
22	甲霜灵	111.8	77.1	101.9	133.2
23	氧环唑	99.0	108.1	92.3	96.1
24	氯吡脲	90.1	101.8	0	0
25	杀扑磷	123.6	81.6	146.2	87.2
26	亚胺硫磷	126.2	106.2	145.7	86.7
27	嘧菌酯	110.8	105.3	101.6	98.1
28	乙霉威	98.0	76.0	101.7	91.7
29	扑灭津	104.7	95.7	104.2	96.5
30	氟苯嘧啶醇	90.3	88.7	95.2	89.3
31	嘧菌环胺	102.7	92.4	93.8	104.8
32	多效唑	96.5	93.3	97.1	92.2
33	三唑酮	109.7	107.1	110.3	99.7
34	腈菌唑	113.9	99.7	97.5	92.6
35	三唑醇	109.7	99.6	110.7	119.0
36	氯苯嘧啶醇	79.7	99.5	92.5	100.7
37	灭线磷	77.6	82.0	71.5	68.7
38	除虫脲	125.3	52.6	77.2	84.0
39	氟硅唑	76.7	96.0	101.8	96.1
40	灭幼脲	105.2	74.8	82.5	83.0
41	戊菌唑	101.1	98.0	95.7	92.0
42	戊唑醇	101.2	107.3	106.1	88.1
43	莎稗磷	90.2	87.9	90.1	73.1
44	甲基嘧啶磷	71.8	52.3	40.6	45.6
45	丙环唑	75.9	92.2	101.1	51.7
46	二嗪磷	109.9	96.9	92.7	89.5
47	辛硫磷	91.3	78.8	29.8	54.0
48	环氟菌胺	85.5	83.2	85.2	69.6
49	四螨嗪	88.2	74.6	51.9	52.3
50	异柳磷	73.7	68.6	68.0	48.3
51	氟菌唑	87.4	97.5	97.8	94.9
52	烯唑醇	97.7	89.3	94.7	89.0
53	苯醚甲环唑	125.9	148.9	50.8	130.9
54	茚虫威	99.9	90.6	102.5	87.8
55	嘧啶磷	91.5	81.9	89.0	82.8
56	特丁硫磷	96.5	85.9	87.0	73.1
57	乙硫磷	74.5	127.4	22.0	20.4
58	毒死蜱	109.7	87.7	88.9	65.0
59	噻螨酮	92.0	83.9	64.7	51.2
60	氟虫脲	135.2	273.4	68.8	117.7
61	哒螨灵	95.1	98.7	77.4	48.2

从表4可知，在采用PSA/Carb复合柱、 Carb柱净化时，氯吡脲没有回收率，甲基嘧啶磷、乙硫磷、哒螨灵的回收率偏低，所以舍弃，通过比较PSA萃取柱和NH2萃取柱， PSA的综合效果更好，所以选择PSA固相萃取柱进行样品净化。在确定净化用固相萃取柱后，对萃取柱的洗脱溶剂进行了选择，本方法固相萃取柱净化选择杂质吸附模式，上样流出液直接收集，并用合适的溶剂对萃取柱进行洗脱，考察了乙腈、乙腈-甲醇（1+1，V/V）、甲醇三种洗脱溶剂，发现用乙腈洗脱时，需要的洗脱体积较大（8mL）以上，均选择 5mL洗脱时，乙腈-甲醇（1+1，V/V）、甲醇能够洗脱完全，甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲霜灵、腈菌唑等的回收率优于用纯乙腈洗脱，但用纯甲醇洗脱时，有较多的杂质被洗脱下来，所以最终确定用乙腈-甲醇（1+1，V/V）为洗脱溶剂。最终确定的样品提取净化方法：称取2.0 g（精确至0.01 g）试样于50 mL离心管中，加入6 mL磷酸氢二钠缓冲液（5%，含30%氯化钠），振摇1 min，用氢氧化钠溶液调节pH至8~9，加入10.0 mL乙腈，振荡提取10 min， 4000 r/min离心5 min，准确取5.0 mL乙腈提取液，上样于活化好的N-丙基乙二胺（ PSA）固相萃取柱，然后用5 mL乙腈-甲醇（ 1+1， V/V）洗脱，固相萃取过程保持流速2 ~ 3 mL/min，于40 ℃旋转蒸发至近干，用1.00 mL甲醇-甲酸溶液（65+35，V/V）溶解定容，过0.2 mm有机系微孔滤膜，供液相色谱-串联质谱法检测。

样品基质效应

利用不含农药的空白样品提取液配制多农药的混合基质标准溶液，进样测定，与同浓度标准溶液的质谱响应值进行比较，考察不同样品基质对农药质谱电离的基质效应，每种样品基质平行配制2 个同浓度的基质标准，基质效应以基质标准溶液的质谱峰面积与标准溶液的质谱峰面积相比增加或减少的百分比来表示，具体见表5，峰面积偏差超过15%可以认为是存在基质效应。

表 5 样品质谱测定时的基质效应

序号	化合物	样品基质（以峰面积增加或降低的百分比表示基质效应，单位为%）
		苹果	石榴	柑桔	猕猴桃

1	甲胺磷	-20.8	-25.3	-36.7	-41.2	-27.7	-20.7	-22.3	-31.2
2	乙酰甲胺磷	-32.6	-30.1	-20.9	-24.9	-17.6	-18.4	-34.7	-33.3
3	多菌灵	-15.7	-16.6	-14.3	-15.5	32.2	37.8	-16.9	-11.6
4	灭多威	-7.9	-10.8	-9.6	-11.3	-7.8	-9.0	-10.0	-8.5
5	噻菌灵	2.1	5.6	10.8	6.5	3.3	1.6	6.3	5.5
6	吡虫啉	3.9	2.3	5.3	4.2	-4.5	-5.7	3.6	2.9
7	吡虫清	-10.1	-8.2	-10.1	-10.6	-19.9	-16.1	-23.8	-21.9
8	敌百虫	-27.8	-26.3	-32.0	-41.3	-40.1	-46.1	-10.2	-15.5
9	抗蚜威	10.1	12.1	7.2	5.6	-16.0	-14.4	-6.9	-11.3
10	三环唑	-17.5	-19	-29.9	-33.0	-19.3	-24.5	-15.7	-23.9
11	速灭威	-8.3	-9.9	9.3	3.8	-12.8	-9.9	-20.3	-22.8
12	敌敌畏	7.6	5.7	-2.4	0.4	6.2	9.1	8.2	5.8
13	残杀威	-4.1	-2.5	-9.0	9.9	-10.3	-11.7	-9.5	-11.1
14	克百威	-17.2	-19.4	-9.9	-12.7	-9.1	-11.9	-3.5	-3.2
15	西玛津	-32.9	-35.5	-0.7	-4.8	-26.0	-25.3	-14.5	-17.8
16	抑霉唑	-2.8	-5.1	-6.5	-9.8	7.9	-2.2	-2.6	-5.7
17	甲萘威	-12.7	-9.1	-28.7	-30.2	-28.6	-27.7	-20.2	-19.4
18	异丙威	-3.5	8.3	-0.6	2.1	-14.7	-11.8	0.1	-0.1
19	嘧霉胺	19.7	22.8	16.3	12.9	-2.4	-7.2	-9.7	-6.6
20	莠去津	0.7	-2.6	0.4	-2.3	-17.5	-16.1	3.2	-0.5
21	水胺硫磷	-17.5	-19.9	-10.0	-5.2	-3.6	-0.4	-21.4	-16.3
22	甲霜灵	3.3	1.0	-1.2	-2.0	-1.6	-0.9	-1.3	-3
23	氧环唑	1.3	-4.2	-8.2	-8.1	6.8	5.9	0.5	-1.4
24	氯吡脲	-1.4	1.7	3.4	-0.3	-8.5	-8.0	-0.6	1.8
25	杀扑磷	-2.4	3.5	-16.7	-9.1	11.4	14.8	-12.1	-5.0
26	亚胺硫磷	5.4	2.2	-13.0	-14.9	2.7	-3.1	-18.3	-19.9
27	嘧菌酯	6.8	2.2	6.8	4.3	8.6	6.1	2.7	-1.6
28	乙霉威	-4.4	-5.2	-9.2	-12.4	21.2	26.7	-4.8	-2.4
29	扑灭津	6.1	2.6	2.0	-0.2	4.6	-3.8	-5.8	5.5
30	氟苯嘧啶醇	-12.9	-12.0	-16.8	-15.4	-8.9	-6.9	1.0	-2.6
31	嘧菌环胺	1.1	-1.7	-14.2	-14.5	21.8	18.5	-5.4	-8.4
32	多效唑	1.9	-3.8	3.2	-1.7	2.9	-0.1	4.3	-1.5
33	三唑酮	-0.9	-1.6	4.8	-1.2	1.7	-3.5	9.6	11.3
34	腈菌唑	3.4	7.4	-8.4	-10.8	-5.7	-2.6	2.7	4.6
35	三唑醇	14.3	10.7	-13.2	-11.2	-2.2	2.8	-0.2	0.9
36	氯苯嘧啶醇	0.5	-0.1	-0.5	1.8	-1.2	3.5	-7.0	-7.7
37	灭线磷	1.3	1.5	-3.4	-6.0	-5.6	-8.9	9.5	9.8
38	除虫脲	-3.5	0.4	-4.8	2.6	-18.1	-13.4	-0.5	2.5
39	氟硅唑	9.7	13.2	-11.5	-4.8	2.1	0.1	6.4	-1.7
40	灭幼脲	-2.9	5.3	-7.9	-7.9	-3.5	4.8	27.6	21.7
41	戊菌唑	-16.1	-14.3	-5.7	1.9	-18.5	-18.6	-4.5	-5.3
42	戊唑醇	0.2	-5.8	7.9	6.8	-3.3	-6.4	-14.2	-16.7
43	莎稗磷	-3.5	1.0	-4.6	1.4	-11.5	-12.6	-7.3	1.9
44	甲基嘧啶磷	10.3	13.8	-8.9	-5.5	-17.2	-16.7	5.8	8.0
45	丙环唑	-3.6	1.2	6.4	-1.6	1.7	-1.0	18.7	15.7
46	二嗪磷	12.5	8.9	-7.9	1.3	-29.8	-35.0	13.5	11.2
47	辛硫磷	-3.2	-0.1	4.8	5.2	10.5	11.9	11.3	7.9
48	环氟菌胺	14.2	14.2	-30.1	-30.9	-5.2	-6.3	-4.4	-3.5
49	四螨嗪	4.0	2.6	11.2	8.6	-26.4	-22.3	2.7	6.9
50	异柳磷	8.3	10.4	12.4	10.0	-9.3	-9.5	-4.3	-3.5
51	氟菌唑	37.7	30.3	40.0	49.1	19.4	15.5	79.8	75.8
52	烯唑醇	4.7	2.2	-10.0	-8.7	-1.0	3.8	8.9	11.5
53	苯醚甲环唑	8.2	3.7	4.4	-3.2	-16.6	-20.9	-15.6	-18.0
54	茚虫威	1.4	-1.0	-15.1	-16.3	-7.5	-3.3	-1.5	0.9
55	嘧啶磷	-7.2	-1.7	-9.6	-3.8	1.7	-1.7	4.5	-1.3
56	特丁硫磷	6.3	-4.7	2.6	-3.8	2.1	-5.7	-2.2	-7.4
57	乙硫磷	2.6	-4.9	4.8	8.8	-4.2	-8.9	8.2	3.9
58	毒死蜱	-0.8	3.8	-2.3	4.8	-5.8	3.2	0.1	-2.5
59	噻螨酮	0.9	-7.2	3.2	-6.1	-21	-19.5	-11.6	-13.3
60	氟虫脲	5.6	-1.3	2.0	-4.3	-27.9	-26.3	-16.1	-13.8
61	哒螨灵	7.0	12.9	-8.7	-4.1	-17.5	-21.0	6.6	-4.8

以偏差 15%来判定，偏差在15%以内可以认为是没有明显的基质效应，可以用标准溶液来直接进行定量，

偏差超过15%可以认为是存在明显的基质效应，定量时需要校正，由表5可知，部分化合物存在明显的基质

抑制或增强效应，而且不同样品基质产生的基质效应也不同，为降低基质效应对定量结果的影响，需要配制

基质标准溶液对定量结果进行校正，基质标准采用待测样品同基质的空白样品来配制，而且需要现用现配。

线性方程及相关系数、检出限、测定低限（定量限）

分别对加标阴性样品进行测定，以标准溶液的质量浓度为横坐标，被测组分的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。线性与测定低限配制浓度均为0.01、 0.02、 0.05、 0.1、 0.2、 0.5 μg/mL农药混合系列标准溶液，按方法规定的色谱条件进样检测，并以标准浓度（ X，μg/mL）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标作图，线性方程及相关系数见表6，相关系数均大于 0.95，满足残留测定要求。

在空白样品中添加混合标准溶液，使加标水平为 0.01mg/kg，依法处理后进样测定，以3 倍信噪比（ S/N=3）计算检出限，以 10 倍信噪比（ S/N=3）计算测定低限，结果如表6所示，农药的测定低限均低于 0.01 mg/kg，在满足残留限量要求的情况下，定低限均规定为 0.01 mg/kg。

表 6 线性方程、相关系数、检出限、测定低限（定量限）

NO.	Compound Name	Curve Equation	检出限（ mg/kg）	测定低限（ mg/kg）
1	甲胺磷	Y = 2.928e4X + 8.448e4; R^2: 0.9909	0.0012	0.0039
2	乙酰甲胺磷	Y = 2.886e5X - 8.043e4; R^2: 0.9951	0.00092	0.0031
3	多菌灵	Y = 4.647e3X - 1.113e5; R^2: 0.9977	0.00035	0.0012
4	灭多威	Y = 1.743e5X - 1.563e4; R^2: 0.9988	0.0016	0.0055
5	噻菌灵	Y = 2.186e4X - 1.568e5; R^2: 0.9988	0.0012	0.004
6	吡虫啉	Y = 2.457e5X - 4.899e4; R^2: 0.9982	0.0014	0.0047
7	吡虫清	Y = 9.369e4X - 1.577e4; R^2: 0.9987	0.0015	0.005
8	敌百虫	Y = 3.471e4X - 9.574e4; R^2: 0.9981	0.0021	0.007
9	抗蚜威	Y = 1.283e5X + 8.851e5; R^2: 0.9933	0.0019	0.0064
10	三环唑	Y = 5.121e4X - 2.316e4; R^2: 0.9979	0.00061	0.002
11	速灭威	Y = 2.884e3X - 1.457e3; R^2: 0.9944	0.00055	0.0018
12	敌敌畏	Y = 1.177e4X - 4.531e4; R^2: 0.9985	0.0023	0.0076
13	残杀威	Y = 1.261e5X - 2.198e4; R^2: 0.9982	0.0023	0.0078
14	克百威	Y = 2.278e4X - 9.548e3; R^2: 0.9973	0.0012	0.0041
15	西玛津	Y = 3.246e4X - 6.397e3; R^2: 0.9988	0.0012	0.0041
16	抑霉唑	Y = 4.027e4X - 6.521e4; R^2: 0.9992	0.0017	0.0056
17	甲萘威	Y = 5.431e4X - 4.017e4; R^2: 0.9982	0.0015	0.005
18	异丙威	Y = 3.655e4X - 2.736e4; R^2: 0.9980	0.00023	0.00077
19	嘧霉胺	Y = 6.427e4X + 5.536e4; R^2: 0.9997	0.0018	0.006
20	莠去津	Y = 2.06e4X - 1.038e4; R^2: 0.9978	0.0025	0.0085
21	水胺硫磷	Y = 2.765e4X + 4.964e2; R^2: 0.9912	0.0028	0.0093
22	甲霜灵	Y = 1.243e4X + 1.058e5; R^2: 0.9961	0.0016	0.0052
23	氧环唑	Y = 3.345e4X - 3.761e4; R^2: 0.9945	0.00081	0.0027
24	氯吡脲	Y = 7.855e4X - 3.277e4; R^2: 0.9932	0.0026	0.0085
25	杀扑磷	Y = 1.422e5X - 6.298e4; R^2: 0.9968	0.0022	0.0073
26	亚胺硫磷	Y = 3.939e2X + 2.697e3; R^2: 0.9954	0.0024	0.0081
27	嘧菌酯	Y = 8.054e1X - 1.385e2; R^2: 0.9946	0.0023	0.0078
28	乙霉威	Y = 5.986e3X + 2e3; R^2: 0.9923	0.0016	0.0054
29	扑灭津	Y = 1.068e6X + 1.497e4; R^2: 0.9923	0.0012	0.0041
30	氟苯嘧啶醇	Y = 3.252e5X - 9.84e4; R^2: 0.9970	0.0027	0.0089
31	嘧菌环胺	Y = 2.498e5X - 5.16e5; R^2: 0.9968	0.0019	0.0065
32	多效唑	Y = 4.471e3X - 1.702e4; R^2: 0.9985	0.0017	0.0056
33	三唑酮	Y = 8.38e3X - 2.9e3; R^2: 0.9949	0.0016	0.0054
34	腈菌唑	Y = 2.304e3X + 1.186e3; R^2: 0.9973	0.002	0.0066
35	三唑醇	Y = 3.262e4X - 4.403e3; R^2: 0.9991	0.0021	0.007
36	氯苯嘧啶醇	Y = 2.009e3X - 1.562e3; R^2: 0.9957	0.0019	0.0065
37	灭线磷	Y = 7.469e3X - 3.682e2; R^2: 0.9959	0.0026	0.0087
38	除虫脲	Y = 5.62e4X - 9.771e3; R^2: 0.9949	0.0024	0.008
39	氟硅唑	Y = 5.805e2X - 4.753e3; R^2: 0.9952	0.00097	0.0032
40	灭幼脲	Y = 261317 X – 593.5；R^2:0.9822	0.0024	0.0079
41	戊菌唑	Y = 1275780 X – 5510.9 ；R^2: 0.9751	0.0015	0.0049
42	戊唑醇	Y = 2395540 X + 88.1 ；R^2: 0.9875	0.00016	0.00054
43	莎稗磷	Y = 1547890 X – 1505.2 ；R^2: 0.9908	0.0012	0.0039
44	甲基嘧啶磷	Y = 2703960 X + 664.2 ；R^2: 0.9972	0.00036	0.0012
45	丙环唑	Y = 1097380 X – 169.6 ；R^2: 0.9823	0.00043	0.0014
46	二嗪磷	Y = 6792510 X – 3724.7 ；R^2: 0.9966	0.00059	0.002
47	辛硫磷	Y = 404569 X – 648.8 ；R^2: 0.9841	0.0023	0.0078
48	环氟菌胺	Y = 727228 X – 2833.7 ；R^2: 0.9819	0.0013	0.0043
49	四螨嗪	Y = 463841 X – 1303.7 ；R^2: 0.9850	0.0023	0.0077
50	异柳磷	Y = 924567 X + 388.2 ；R^2: 0.9985	0.00074	0.0025
51	氟菌唑	Y = 2607060 X – 6063.5 ；R^2: 0.9837	0.0024	0.0081
52	烯唑醇	Y = 1816630 X – 4940.7 ；R^2: 0.9937	0.0029	0.0096
53	苯醚甲环唑	Y = 2360180 X – 3627.1 ；R^2: 0.9912	0.0017	0.0055
54	茚虫威	Y = 89027.6 X – 141.3 ；R^2: 0.9918	0.0029	0.0097
55	嘧啶磷	Y = 19212300 X – 35211.4 ；R^2: 0.9912	0.0018	0.0062
56	特丁硫磷	Y = 401770 X – 359.4 ；R^2: 0.9922	0.0016	0.0055
57	乙硫磷	Y = 1146910 X – 1938.6 ；R^2: 0.9941	0.0019	0.0065
58	毒死蜱	Y = 152968 X – 295.2 ；R^2: 0.9934	0.0028	0.0093
59	噻螨酮	Y = 660687 X – 1482.5 ；R^2: 0.9949	0.0025	0.0083
60	氟虫脲	Y = 388330 X – 914.8 ；R^2: 0.9944	0.0021	0.007
61	哒螨灵	Y = 3364570 X + 645.8 ；R^2: 0.9980	0.00038	0.0013

方法的回收率

分别向不含待测物的苹果、柑桔空白基质中添加农残混合标准溶液, 0.01、 0.02、 0.05mg/kg3 个水平进行加标回收率实验, 每个水平平行测定6次,加标回收率在（50～130）%之间，相对标准偏差RSD≤25%。

结论：

1、目前对水果中多种农药残留同时测定的标准有NY/T 761-2008、GB/T20769-2008、GB/T 19426-2006，其中NY/T 761-2008是系列标准，主要采用气相色谱法、气相色谱-质谱法及液相色谱-柱后衍生法对有机磷类、有机氯类和拟除虫菊酯类、氨基甲酸酯类农药分别进行测定，实际仍是多个测定方法，而且对吡虫啉、吡虫清、多菌灵、四螨嗪、苯醚甲环唑、除虫脲、灭幼脲、噻菌灵、抑霉唑等多种常用农药没有涉及；GB/T 20769-2008 和 GB/T 19426-2006都是同时测定 450 种以上农药残留的方法，但检测项目过多，检测没有针对性，而且检测的样品基质适用性差，在实验室的实际应用中并不方便，在日常检测中多作为参考标准；本法为本实验室内部农药残留检测来确定检测样品及检测项目，针对性和实用性较强。

2、在实验中发现，定容溶剂对部分农药的色谱峰形及质谱响应值有显著的影响，特别是对甲胺磷、乙酰甲胺磷、乙硫磷、毒死蜱、辛硫磷、哒螨灵影响大

3、在采用PSA/Carb复合柱、 Carb柱净化时，氯吡脲没有回收率，甲基嘧啶磷、乙硫磷、哒螨灵的回收率偏低，所以舍弃，通过比较PSA萃取柱和NH2 萃取柱， PSA的综合效果更好，所以选择PSA固相萃取柱进行样品净化；并用合适的溶剂对萃取柱进行洗脱，考察了乙腈、乙腈-甲醇（1+1，V/V）、甲醇三种洗脱溶剂，发现用乙腈洗脱时，需要的洗脱体积较大（8mL）以上，均选择 5mL洗脱时，乙腈-甲醇（1+1，V/V）、甲醇能够洗脱完全，甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲霜灵、腈菌唑等的回收率优于用纯乙腈洗脱，但用纯甲醇洗脱时，有较多的杂质被洗脱下来，所以最终确定用乙腈-甲醇（1+1，V/V）为洗脱溶剂。

因此：最终确定的样品提取净化方法：称取2.0 g（精确至0.01 g）试样于50 mL离心管中，加入6 mL磷酸氢二钠缓冲液（5%，含30%氯化钠），振摇1 min，用氢氧化钠溶液调节pH至8~9，加入10.0 mL乙腈，振荡提取10 min，4000 r/min离心5 min，准确取5.0 mL乙腈提取液，上样于活化好的N-丙基乙二胺（ PSA）固相萃取柱，然后用5 mL乙腈-甲醇（ 1+1， V/V）洗脱，固相萃取过程保持流速2 ~ 3 mL/min，于40 ℃旋转蒸发至近干，用1.00 mL甲醇-甲酸溶液（65+35，V/V）溶解定容，过0.2 mm有机系微孔滤膜，供液相色谱-串联质谱法检测。

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