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第8楼2007/04/24
4.内容:
4.1仪器设备与材料
4.1.1冰箱:0-4℃
4.1.2恒培养箱:36±1℃
4.1.3恒温水浴锅
4.1.4显微镜:10×-100×
4.1.5灭菌乳钵
4.1.6架盘药物天平:0-500g,精确至0.5g
4.1.7灭菌吸管1ml、10ml
4.1.8灭菌锥形瓶:500 ml
4.1.9灭菌玻璃珠:直径约5mm
4.1.10灭菌培养皿:直径90mm
4.1.11灭菌试管:16mm×160mm
4.1.12灭菌刀、剪子、镊子等。
珠海科恩生物工程有限公司 操作标准
SW06-04-01-002-00 2/2
2.操作步骤
2.1检样稀释
2.1.1以无菌操作将检样25g(ml)放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
2.1.2用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
2.1.3另取1ml灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1ml灭菌吸管。
2.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种三管。
2.1.5乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,每一稀释度接种三管,置36±1℃培养箱内,培养24±2小时,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告大肠菌群阴性,如有产气者,则继续做以下实验。
3.分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃培养箱内培养18-24小时,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
4.证实试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃培养箱内培养24±2小时,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
5.报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100ml(g)大肠菌群的MPN值。
6. 清场
6.1实验完毕,用消毒药水擦试工作台面及地面。
6.2接触过对照菌液的玻璃仪器均需121℃30分钟消毒灭菌后,方可清洗。
6.3培养平皿使用完毕,需121℃30分钟灭菌后,方可清洗。