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【实战宝典】液相色谱流动相配比对峰高和峰面积有哪些影响？

小官人

2021/03/24

液相色谱（LC）

问题描述：检测二氯喹啉酸残留，色谱条件：流动相为乙腈：水（V/V）=1:1，水用磷酸调到pH=4；流速1mL/min；波长225nm；进样量20μL。此条件下，标样出峰时间较早，保留时间4min左右，样品峰分不开。调整了流动相比例，乙腈：水（V/V）=1:3，保留时间15min左右，但峰高和峰面积明显降低，且浓度较低时不出峰，怎样解决？

解答：（1）二氯喹啉酸属于弱酸性化合物，在水中的溶解度为0.065mg/L，在甲醇中溶解性比乙腈要好（难溶于乙腈），问题产生的原因可能是目标物在乙腈中溶解度低，可以考虑改用甲醇和水作为流动相。

（2）二氯喹啉酸的pKa值为4.35，对于弱酸性物质一般流动相pH值的选用原则是最好小于等于其pKa值两个单位，以保证待测物99%以上呈分子状态，否则容易产生峰拖尾、峰分叉等现象。而原水相部分pH=4，和二氯喹啉酸pKa值很接近，该条件下，二氯喹啉酸处于分子、离子形态各占一半的混合状态，不利于二氯喹啉酸在色谱柱上的保留，可能会影响目标物峰型。兼顾目标物pKa值和色谱柱pH耐受范围，建议将流动相pH调节至2~3来优化实验。

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