测LOD时必须要稀释到完全不出峰吗

应助达人

根据环境检测的标准要求，通常情况下不是这样的。具体请参考HJ 168-2020中的相关条款。

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LOD的信噪比为3，一般稀释到5就行，算一下响应和浓度的关系，如浓度缩小100倍，响应也缩小100倍，大约按关系稀释，跑一下就行

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HPLC色谱图上的基线并不是一条直线,而是呈现锯齿状,这就是检测器的噪音信号.通过测定噪音峰峰高与样品峰峰高的的比值,来确定在此系统条件下样品的检出限与定量限.
检出限 流动相中样品组分在检测器上产生两倍基线噪声信号时相当的浓度或质量流量定为HPLC法的检出限.也就是信噪比为2：1的时候的样品浓度.
定量限 流动相中样品组分在检测器上产生十倍基线噪声信号时相当的浓度或质量流量定为HPLC法的定量限.也就是信噪比为10：1的时候的样品浓度.
测定检出限和定量限的所用的方法,就是把样品稀释成一系列浓度梯度,注入HPLC仪中,测定信噪比,在色谱图上直接测定就可以了.

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农残的定量限不是稀释来的，是做添加回收得来的。不断往下探添加回收的下限，直到这个浓度满足不了回收要求，我们就把上一个能满足回收要求的浓度视为方法定量限。

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方法标准的各项验证主要参考一下标准：GB/T 27417-2017 《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》、GB/T 35655-2017《化学分析方法验证确认和内部质量控制实施指南 色谱分析》和GB/T 32465-2015《化学分析方法验证确认和内部质量控制》

方法检出限的验证：
将标准中规定的方法检出限量添加到空白样品中，独立检测10次，检出概率为50%时即为达到标准方法的检出限。检出率以3倍信噪比计。
如果方法中已给出方法检出限，则在该含量水平上通过分析该含量水平的样品验证方法检出限，分析结果应在给出的方法检出限±20%范围内（GB/T 32465-2015）。

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参照GB/T 27417-2017 《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》中5.4.2.2确定检出限的方法a)目视评价法评估LODb)空白标准偏差法评估LOD C)校准方程的适用范围评估LOD d)信噪比法评估LOD ,液质联用的LOD评定需要参照d)信噪比法评估LOD,
对于定量方法来说,由于仪器分析过程中都会有背景噪音,常用的方法就是利用已知低浓度的分析物样品与空白样品的测量信号进行比较,确定能够检出的最小的浓度,典型的可接受的信噪比是2;1或3:1,对于定性方法来说,低于临界浓度的选择是不可靠的,该临界值会随着 试验条件条件中的试剂,加标量,基质等不同而变化,确定定性的方法LOD,是可以通过空白样品中添加几个不同浓度水平的标液,在每个水平分别随机检测10次,记录检测结果(阳性或阴性)等
测LOD时必须要稀释到完全不出峰是错误做法,建议添加试剂空白加标

LOD定义是信噪比3，但是实际做不可能正好稀释到3。一般稀释到信噪比10以下就可以，取三个点，按比例外推或者内插求得信噪比3和10对应的浓度