开发了一个梯度方法，当我在我的系统上运行它重复性很好，但我不能在另一个系统上得到相同的结果？
当梯度法从一个高效液相色谱系统转移到另一个系统时，偶尔会出现一些困难。除非系统完全相同，否则用户通常会在保留时间上发生一些变化。大多数情况下，留存率的变化不会影响到解决方法的效果，人们通常可以忽略这些差异。另一方面，通过对潜在原因的正确理解，我们可以调整梯度，以从不同的HPLC系统获得相同的性能。哪些可能导致我的方法传输问题?
最简单的事情是比较你的梯度两个系统。为了做到这一点，你断开色谱柱，并在梯度的b溶剂中添加紫外线吸收剂。如果你使用的是反相体系，你可以在b溶剂中加入10mg /L的对羟基苯甲酸丙酯。然后在两个系统上运行渐变并记录基线。然后将这两个情节相互比较。你需要找到梯度开始的点，你还需要测量梯度剖面。如果你的梯度是线性的，那么你只需要检查梯度的斜率。是否有一种简单的方法来补偿驻留体积的差异?
有一个解决方案大多数时候都是有效的。如果梯度停留体积在你的方法转移到的系统上较小，你可以通过在梯度开始时设计一个补偿体积差异的等稳部分来补偿停留体积的不足。剩下的梯度保持不变。另一方面，如果第二个系统的梯度停留体积比第一个系统的梯度停留体积大，则情况更困难。原则上，您可以启动梯度，然后在延迟一段时间后注入样品，这段时间可以解释两种系统之间梯度停留体积的差异。但在自动系统上，这可能是不可能的，因为注入会触发梯度的开始。在这种情况下，您可能需要回到原点并重新开发该方法。我能做什么来防止这种情况在未来发生?
您可以通过为最终将使用该方法的HPLC系统开发该方法来避免这种情况。这需要一些远见和一些计划，但通常不是不可能的。您首先需要做的是描述可能用于您的方法的系统。对于每个系统，你需要知道两件基本的事情:梯度驻留体积和合成精度。你可以在一个实验中得到这两个信息:如上所述，你在你的b溶剂中添加一个紫外线吸收剂。然后你在0% B到100% B的增量5%的多个步骤梯度。流量应该是通常使用的流量，所以最有可能你将使用1毫升/分钟的流量。步骤之间的间隔应该是几分钟，或者5分钟。现在在不同的系统上运行这个梯度，而不需要一个柱，并记录检测器的响应。为每一步编程的时间和实际发生的步骤之间的时间延迟给你梯度延迟时间。台阶的高度给了你构图的一个度量。步骤会被抹去一点，这是系统中混合体积的函数。
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