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【实战宝典】普通PCR出现假阴性结果,不出现扩增条带的可能因素有哪些?
小官人-闭关修炼中
2022/07/07
私聊
PCR
问题描述:普通
PCR
出现假阴性结果,不出现扩增条带的可能因素有哪些?
解答:
原因需要在
PCR
反应的关键环节上寻找,如下:
(
1
)
DNA
模板中含有杂
蛋白质
①
DNA
模板中蛋白质没有消化完全,特别是染色体中的组蛋白;
②
在提取制备模板时
DNA
丢失过多;
③
模板
DNA
中有过多的
酚残留;
④
模板
DNA
变性不彻底。
(
2
)酶失活导致
PCR
扩增失败,更换新酶重新实验,或着将新旧两种酶同时使用,根据扩增结果分析是否因酶的活性而导致
PCR
扩增失败。
(
3
)引物的问题
引物合成质量、引物的浓度、上游和下游引物浓度是否对称等,是
PCR
失败或扩增条带不理想容易弥散的常见原因。有些批次的引物合成质量有问题,上下游引物的浓度与标识的浓度不符,造成低效率的不对称扩增。
(
4
)
Mg2+
离子浓度对
PCR
扩增效率影响很大,浓度过高可降低
PCR
扩增的特异性,浓度过低则影响
PCR
扩增产量,甚至使
PCR
扩增失败。
(
5
)物理原因:变性对
PCR
扩增来说相当重要,如变性温度不合适,变性时间短,极有可能出现假阴性。
以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》
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