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CE谱图疑难杂症汇总

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2022/11/02
冲锋队

毛细管电泳（CE）

1. 样品峰出现拖尾，样品问题，样品在毛细管内壁吸附，对于蛋白、核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采用极端 pH 条件或动态涂层防止样品吸附。样品浓度太高，适当降低样品浓度，或者降低进样时间；

2.样品峰形不对称，毛细管入口切口不平齐，重新切割毛细管入口，注意毛细管切割方法，不可以用力过猛或反复刮擦；缓冲溶液与样品溶液电导率差别过大，可更改其他样品溶剂或采用缓冲溶液作为样品溶剂；

3.样品峰过宽，样品浓度太高或者样品本身性质的影响，降低样品进样量，若有改善，则样品浓度太大，可降低样品浓度或减少进样量；若无改善，则样品本身性质不均一，此原因主要是针对蛋白样品；小分子样品发生的概率较低；

4. 峰型和出峰迁移时间不稳定，

4.1 背景缓冲溶液种类选择不对，缓冲溶液不稳定，易电解，或者是样品在原缓冲溶液条件下不稳定，需更换其它种类的缓冲溶液；加压的过程中消耗了背景缓冲液，在毛细管的一端引起缓冲液 pH 和离子强度的改变，需更换新的电解质；

4.2 样品吸附，通过使用涂层柱、冲洗循环、极端 pH 或者高离子强度缓冲液来降低样品吸附；

4.3 针与针之间的冲洗不充分，样品中有物质易发生吸附，首先在每次样品运行之前用 0.1 M NaOH 短时间冲洗毛细管，看迁移时间能否重复，如果效果不佳，请使用涂层毛细管来改善结果或者将样品再次处理，去除样品中易吸附的组分；

4.4毛细管电渗流变化，使用适当的毛细管预处理和冲洗方法，确保一根毛细管一种应用；毛细管平衡不完全，分析序列之前，运行一到两针进样，保证毛细管壁和温度稳定；

4.5通用瓶液面高度不一样，在分离过程中导致不稳定的虹吸流，特别是用短或大孔径的毛细管时较为明显。进样之前检查通用瓶液面高度是否一致。

5. 迁移时间可重复但峰面积重复性不好，

5.1 毛细管两端未切平，重新切割毛细管入口，注意毛细管切割方法，不可以用力过猛或反复刮擦；若问题依然存在，可尝试电动进样，若电动进样可保持重现，则压力控制或气路存在问题，请联系工程师；

5.2 样品移动，在进样后分离前，在冲洗瓶中沾洗毛细管；样品蒸发，密封好样品瓶或者添加一个内标；粘度不同，进样体积是与粘度有关的，需匹配样品和标准品的粘度或者使用内标。

6. 峰型差，

6.1检查毛细管两端是否受损，不正确的插入通用瓶可能损坏毛细管两端，引起峰型拖尾。检查，如有损坏，需更换。

6.2样品浓度过高，样品过载严重降低柱效和分辨率，稀释样品或者缩短进样时间。

6.3 卡盒温度过高，高温可能引起峰拆分和扭曲，如果有可能的话，使用较低温度。

6.4电解质浓度不正确，如果电解质浓度过高，电流过高，将会导致与温度相关的峰型扭曲；相反，如果电解质浓度太低，样品的导电性将会使峰型扭曲或者拖尾。在方法开发过程，需优化好电解质浓度。电解质迁移淌度不匹配，使用与分析物相同淌度的电解质，在间接检测中，淌度匹配是至关重要的。

6.5 分离电压选择不正确，电压过大将会引起与温度有关的峰扭曲，然而，太低的电压将会引起迁移时间延长，与扩散相关的峰展宽。优化应用的电压。

6.6 进样时间过长，样品体积过量将会引起分辨率和分离效率降低，如果可以的话，可以降低进样时间。

6.7 样品溶解度低，如果样品在电解质中是不溶的，样品可能在毛细管内沉淀，选择其他的电解质保证样品在其中是完全溶解的；样品吸附，通过使用涂层柱、冲洗循环、极端 pH 或者高离子强度缓冲液来降低样品吸附。样品组成，高离子强度和高有机相浓度的溶液会导致很大的峰型扭曲；稀释样品或降低样品进样时间，另外，通过固相萃取方法或者脱盐处理样品也可以起到促进作用。

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