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液相色谱用水注意事项

xiaolanzi5

2022/11/23

液相色谱（LC）

液相色谱用水必须尽可能纯净新鲜，特别是梯度洗脱时。水中最常见的污染来自于微生物的污染。水相的滤吸头如果没有注意及时更换或者清洗，那么这种高比表面的多孔部件将成为微生物繁殖的温床，即使换上新鲜的水相，也会因为其繁殖而产生各种代谢的有机物，当这些物质进入色谱体系就可能成为鬼峰。在各种微生物中，最主要的是革兰氏阴性菌，它们可以在纯水中生存和繁殖，当水中存在如磷酸盐或者乙酸盐时生命活动更加旺盛。在20-35℃时，它们可以迅速繁殖，只需几天就可以在HPLC中检测到它们的存在，而且有研究表明即使pH到9都无法抑制它们的繁殖。建议在水相中至少添加15%的甲醇来抑菌，也有建议至少添加5%的乙腈来达到类似的效果。
另外，水相的溶剂瓶也应该经常用有机溶剂清洗并充分干燥，而不是只是简单用水清洗后接着用。除此之外，有些仪器上配置的泵头密封垫清洗装置（seal-wash）中的清洗液如果没有考虑到抑菌操作（如经常更换或者加入有机相）也会引入微生物污染。

另外还有一个需要特别注意的事项，那就是千万不要使用洗瓶来补充用于HPLC流动相的水，因为来自洗瓶中的水不仅含有从洗瓶塑料中溶解出来的有机物（如塑化剂），而且往往含有不少的微生物及其代谢物！

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