酚试剂溶液空白吸光度异常处理分析

oscar_2007

2022/11/30
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酚试剂溶液空白吸光度异常处理分析

1. 背景

酚试剂溶液配置是依据标准《GB/T 18204.2-2014公共场所卫生检验方法第2部分:化学污染物》7.2酚试剂分光光度法，主要采用酚试剂与空气中甲醛反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化成蓝绿色化合物；利用紫外-可见分光光度计测定其在630nm波长处的吸光度。

2. 酚试剂性质

酚试剂是白色至浅灰色粉末，别名有3-甲基-2-苯并噻唑酮腙盐酸盐，MBTH盐酸盐，Sawickis 试剂，酚试剂（MBTH）；分子式为C₈H₉N₃S·HCl，纯度要求≥98.0%

3.酚试剂配置过程

3.1 酚试剂吸收液原液（1.0g/L）：称量0.10g酚试剂[C₆H₄SN(CH₃)C:NNH₂·HCL,简称MBTH]，使用三级水溶解，并定容于100mL容量瓶中，放冰箱中5-10摄氏度保存，可稳定三天。

3.2 酚试剂吸收工作液（0.05g/L）：量取上述吸收原液50mL，用三级水溶解定容于1000mL容量瓶中，吸收工作液采用现用现配。

3.3 硫酸铁铵溶液显色剂（10g/L）:称量1.0g硫酸铁铵[NH₄Fe（SO₄）₂·12H₂O]用0.1moL/L盐酸溶解，并定容至100mL容量瓶。

4.显色过程

4.1在加有5ml的吸收液中加入0.4mL 1%硫酸铁铵溶液，摇匀。显色时间不低于15min ，使用1cm比色皿，在波长630nm下，以纯水参比，用紫外—可见分光光度计测定各管溶液的吸光度。

5.酚试剂吸收液吸光度异常现象

每天测试员上班第一件事是配置酚试剂吸收液，近来几天发现一个奇怪的现象，测试员配置好吸收液后第一次测得酚试剂空白吸光度后，30min第二次取此吸收液测吸光度，1小时第三次取此吸收液测吸光度，2小时第四次取此吸收液测吸光度，3小时后第五次取此吸收液测吸光度，得到数据如下：

第n次	0	1	2	3	4
间隔时间	0min	30min	60min	120min	180min
吸光度	0.010/0.009	0.016/0.017	0.020/0.022	0.024/0.026	0.025/0.026
显色时间	显色时间相同，15min
显色剂	显色剂采用已配制好的，同一个人配制的

从吸光度结果分析测试员在溶液配制过程中存在以下几点操作不当导致的：

a. 酚试剂吸收原液冷藏后从冰箱拿出后直接配制

酚试剂原液提前一天配制的在从冰箱拿出来时，实验员未放置一段时间让其恢复到室温状态就直接稀释配制，低温下导致配制后测试吸光度较低水平，随着放置时间延长，溶液温度不断上升，导致吸光度上升。

b. 称取酚试剂粉末过程中引入污染

实验员在对酚试剂粉末称量前并没有对称量勺清洁，称量勺引入其他试剂干扰，或者污染整瓶酚试剂粉末。

c. 显色试管脏污导致

通过对新旧显色试管的空白吸光度比对，证明旧试管长期使用本地较高，引起空白试剂偏高。

新试管空白吸光度	0.013	0.012	0.012	0.012	0.012
旧试管空白吸光度	0.024	0.025	0.026	0.023	0.020

d. 比色皿使用错误

比色皿长时间使用，未采用清洗溶剂浸泡，导致比色皿背景吸光度达到0.043，以及实验员对比色皿合理规范使用不熟悉。

e. 酚试剂配制容量瓶或者广口瓶试剂残留导致

酚试剂配制用的容量瓶配过其他溶液，实验员未在配制完清洁，导致残留引起可能性。

f. 粉末转移过程引入污染

酚试剂粉末称量完，在使用烧杯对其溶解过程中，烧杯清洁不到位，引起的污染干扰。

对以上5点进行整改完毕后，重新配制酚试剂溶液，并对实验员宣导，结果如下：

第n次	0	1	2	3	4
间隔时间	0min	30min	60min	120min	180min
吸光度	0.010/0.009	0.010/0.010	0.011/0.011	0.010/0.011	0.013/0.012
显色时间	显色时间相同，15min
显色剂	显色剂采用已配制好的，同一个人配制的

6. 总结

试剂溶液配制是作为实验员开始实验必须掌握的一个关键点，试剂配制错误，实验必定失败。决定实验试剂配制对与错，个人觉得心态最重要，心态是调动工作能动性的首要，实验不能因为实验而实验，不能因为完成而完成。错误的实验完成是无效的。所以做好实验首先要有良好的心态，其次就是发现实验过程每一个异常现象的细节能力。

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wfuse001

第1楼2022/12/10

应助达人

很实用的帖子，大家可以共同学习，很有参考价值！加精华予以鼓励！

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oscar_2007

第2楼2022/12/18

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Insp_79aedfc7

第3楼2023/03/10

1.发现列出的是6点问题，总结是改了5点，哪点不用改呢，是温度吗？2.看改后表格中空白几个结果在0.01左右算是很稳定很成功，表格中的时间，是指从冰箱拿出来吸收液原液配制成吸收液的时间吗？首先我是认可温度会影响试剂化学活性，所以在15min内反应是否充分是可能的，生成有色物质偏低导致吸光度异常是存在的。你的实验没有证明温度的影响，也有可能拿出来放置检测这段时间不断受到环境空气的影响。从结果看0.01是正常值，那第一个表反应的应该是其他几个问题引起的。如果想验证是低温影响，应该吸做个表，开始的吸光度值低于0.01，稳定后是0.01左右