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液质联用(LCMS)
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APOE(载脂蛋白E)不同表型分型
Ins_3606fb94
2023/02/08
私聊
液质联用(LCMS)
APOE
(载脂蛋白
E
)不同表型分型
背景
载脂蛋白E(
apolipoprotein E, ApoE
)作为脂质转运蛋白和低密度脂蛋白受体的主要配体,在胆固醇代谢和心血管疾病中发挥重要作用。
ApoE
有多种异构体,即
ApoE2
、
ApoE3
和
ApoE4
,分别由
APOE
的等位基因 ε
2
,ε
3
和ε
4
来编码;
APOE4
等位基因是阿尔茨海默病的主要危险因素,血清
ApoE
增高与心血管疾病死亡率增加有关,而降低则与
AD
相关死亡率增加有关;
这些研究发现是基于免疫法,如免疫透射比浊法。但基于免疫法的
apoE
的研究数据差异较大;而基于
液相色谱
串联质谱法(
LC-MS
/MS
)的研究数据一致程度较高;
LC-MS
/MS
在定义被分析物和抗干扰方面具有优势,且在血清载脂蛋白的绝对定量上已有较为成熟的应用。
实验方法
1
.
样品制备
1.1 APOE
混合轻标
mix
线性
1
溶液配制:
稀释剂:
0.1%SDC
作为稀释剂
取浓度为
10 ng/
μ
L
的
APOE1234
各轻标肽段溶液
10
μ
L
至于离心管中(共
40
μ
L
),再加入
10
μ
L
稀释剂,混合成为
APOE
混合轻标
mix
线性溶液起始浓度最高点:
2 ng/
μ
L
,共
50
μ
L
;
从
APOE
混合轻标
mix
线性溶液起始浓度
2 ng/
μ
L
继续往下梯度稀释,
2000 pg/
μ
L
、
1000 pg/
μ
L
、
500 pg/
μ
L
、
200 pg/
μ
L
、
100 pg/
μ
L
、
50 pg/
μ
L
、
20 pg/
μ
L
,以上
7
各浓度点作为
APOE
混合轻标
mix
线性
1
;
1.2 APOE
混合重标
mix
溶液配制:
取浓度为
10 ng/
μ
L
的
APOE1234
各重标肽段溶液
10
μ
L
至于离心管中(共
50
μ
L
),再加入
50
μ
L
稀释剂,混合成为
APOE
混合重标浓度最高点:
1 ng/
μ
L
,共
100
μ
L
;
将
APOE
混合重标浓度最高点稀释
10
倍至终浓度为
200 pg/
μ
L
作为混合重标
mix
,共
500
μ
L
;
1.3
配制
APOE
混合线性标曲梯度:
稀释剂:
0.1%SDC
作为稀释剂
取
APOE
混合轻标
mix
线性
1
各浓度点
10
μ
L+
混合重标
mix10
μ
L
,加入
40
μ
L
稀释剂,涡旋混匀,总体积为
60 μL
;
2
仪器方法
2.1
质谱检测
条件
Column:
ChromCore AQ C18 1.8
μ
m
,
2.1
×
100 mm
Mobile Phase:
A) 0.1%FA-H2O
B) 0.1%FA-ACN
Gradient:
t (min)
%A
%B
0
95
5
1
90
10
10
80
20
10.5
60
40
11
10
90
13
10
90
13.5
95
5
15
95
5
Flow Rate:
0.3 mL/min
Temperature:
40
℃
Injection:
10
μ
L
MS:
TSQ Altis
三重四级杆质谱采用
SRM
模式进行检测,检测周期
15 min
;
Sample:
APOE
(载脂蛋白
E
)
2.2 APOE
标样检测条件
3
实验结果
3.1 APOE
标样检测结果
3.2 APOE
标样检测结果
-
线性范围及内标重现性
3.3
实际样品检测结果
4
讨论与总结
简单地说,本研究使用了
APOE1/2/3/4
作为定量肽段,绝对定量方法使用合成的同位素标记肽作为内标物,检测样品中目标肽段的浓度;
结果表明,本实验室优化的前处理方法可尽可能实现该类肽段的释放,回收率达到
50-60%
;
更重要的是,在实际样本的检测中,根据
APOE1/2/3/4
四条肽段的出现情况,可以得出实际血浆提供者的
APOE
基因型,此结果已经与基因检测结果进行核对,且成功率达到
100%
;
公司名称:
南京品生医疗科技有限公司
色谱柱信息:
ChromCore AQ C18 1.8
μ
m, 2.1
×
100mm
分
该帖子已被
版主-nankingee
加5积分,加2经验;加分理由:临床质谱是时下热点
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+关注
私聊
hujiangtao
第1楼
2023/02/09
应助达人
可以参加今年的原创大赛
0
发表回复
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