新版纳他霉素检测方法验证

1 实验室基本情况
表1-1参加验证的人员情况表

2 方法验证过程

2.1 试样预处理

取多个预包装的样品，其中非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆；固体样品用研磨机充分 粉碎并搅拌均匀，均匀的液体直接混匀，取其中的 200g装人玻璃容器中，密封后于 4 ℃保存。

2.2 样品前处理

2.2.1 干酪和再制干酪及其类似品、酱卤肉制品、肉类(熏、烧、烤) 、油炸肉类、西式火腿类、肉灌肠类、 发酵肉制品类、蛋黄酱、沙拉酱

称取5.0g样品(精确至0.01g)，置于 50mL离心管中，加人 15.0mL 甲醇超声提取 20min，加人 5.0mL水混匀，以 4 000r／min离心 l0 min，于 零下 20℃冰箱中冷冻 lh，上清液经 0.22μm有机针头式 过滤器过滤，收集滤液约 2 mL上机测定。

2.2.2 糕点样品

称取 5.0g样品(精确至 0.0lg)，置于 50mL离心管中，加人 l5.0 mL 甲醇超声提取 20min，加人 5.0 mL水混匀，以 4000r／min离心 l0 min，上清液经 0.22μm有机针式过滤器过滤，收集滤液约 2 mL 上机测定。

2.2.3 果蔬汁(浆) 、果汁饮料

称取 5.0g样品(精确至 0.0l g)，置于 50 mL 离心管中，加人 l5.0 mL 甲醇超声提取 20 min，以 4000r／min离心 l0 min，将上清液定量转移至 25mL容量瓶，用水定容至刻度混匀，经 0.22μm有机针 式过滤器过滤，收集滤液约 2 mL上机测定。

2.2.4 发酵酒

量取适量的酒类样品，经 0.22μm针式过滤器过滤，收集滤液约 2 mL上机测定。

2.3标准曲线的制备

取混合标准储备液混合内标储备液用，用甲醇稀释配制成0.1,0.2，0.5,1,2,5ug/ml上机工作液。

2.4测定

2.4.1液相色谱条件

色谱柱： C18 1.7um 2.1*100mm

流动相：A：甲醇 B：乙酸水（5+95）

梯度洗脱

2.4.2流速1.0ml/min

2.4.3检测波长:305nm。

2.4.4柱温30℃

2.4.5进样量10ul

3、 处理结果

3.1线性结果

表1线性范围0.1-5ug/ml

以上结果表明在线性范围0.1-5ug/ml范围内，线性R²均在995以上，浓度和峰面积呈线性关系，线性良好，符合要求。

3.2检出线、定量限

用阴性空白基质逐级稀释混标至0.1ug/ml

当稀释进样浓度为0.1ug/ml时所得信噪比S/N为12.4，得出方法检出限进样浓度S/N为3时的进样浓度为0.025ug/ml左右，以称5g样品，提取液20ml计算检出限为0.1mg/kg，方法定量限为3倍检出限为0.3mg/kg发酵酒直接进样，检出限为0.025mg/L,方法定量限为3倍检出限为0.075mg/L。满足标准要求的试样称取 5.0 g，按照试验方法操作并定容，发酵酒直接测定，各类食品的检出限和定量限如下：干酪和再制干酪及其类似品、酱卤肉制品、肉类(熏、烧、烤) 、油炸肉类、西式火腿类、肉灌肠类、发酵肉制品 类、蛋黄酱、沙拉酱、糕点的检出限为 0．14 mg／kg，定量限为 0．48 mg／kg；果蔬汁(浆) 、果汁饮料检出限 为 0.18 mg／kg，定量限为 0.60 mg／kg；发酵酒的检出限为 0.035 mg／L，定量限为 0.12 mg／L。

3.3方法精密度（重复性）结

对同一加标样品测定2次

标准要求在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%，两次独立结果绝对差值占算数平均值的3%，符合小于10%要求。

4 结论

根据GB5009.286-2022《食品安全国家标准食品中纳他霉素的测定》要求依法检测，检出限、定量限、精密度符合标准规定要求。