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第1楼2023/08/27
【检查方法】
试管接种法,进行促生长能力检查。
【菌液制备与稀释】
1. 白色念珠菌
挑取四代以内(含四代)的白色念珠菌新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中,经20~25℃培养2~3天;使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释,制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。
(稀释梯度:通常情况下为10-6~10-7)
2. 黑曲霉
挑取四代以内(含四代)的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面中,经20~25℃培养5~7天(生长大量黑色菌丝),加入5ml含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液,将孢子洗脱。使用含0.05%聚山梨脂80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或含0.05%聚山梨脂80的0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释,制成每1ml含小于100cfu的菌悬液。
(稀释梯度:通常情况下为10-5~10-6,因菌丝数量不同,可能有误差)
【培养基制备】
被检培养基:称取培养基30.0g于1000ml纯化水中,微温溶解,分装试管,121℃高压灭菌15分钟,冷却,备用。
另准备沙氏葡萄糖琼脂培养基进行稀释菌悬液计数,培养基灭菌后置于44.5℃水浴保温待用。
【实验方法】
1. 培养基阳性组:取稀释后的各试验菌悬液1ml分别加于预先制备的试管培养基中,每种菌接种两支试管。同时分别取1ml菌悬液加于无菌空平皿中,用于计数,每种细菌做两个平板。
2. 培养基阴性组:即空白对照,即不添加菌液。
3. 接种量计数:步骤1中的平皿中,倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基,同时培养基做1个空白。
4. 培养条件:
20~25℃培养 白色念珠菌培养24~48h;黑曲霉培养3~5天
倾注计数用的沙氏葡萄糖琼脂培养基平板置20~25℃培养箱中培养3~5天
【观察记录方法】
参考下述,长情况
A. 白色念珠菌
——SDB试管澄清透明,底部有白色菌团。
B. 黑曲霉
——SDB试管澄清透明,有白色或黑色菌丝团生长。
C.接种量计数=计数培养基平均菌落数—计数培养基空白组菌落数
【判定依据】
接种量在<100CFU,加菌的培养基试管生长良好且与对照培养基相似,空白管无菌生长,则判定合格。