液相色谱的梯度洗脱和等度洗脱都是用在什么操作中呢？

应助达人

等度洗脱

是指在样品组分的分析周期中，流动相的组成比例和流速恒定不变的洗脱方式。

梯度洗脱

是指在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比的洗脱方式。

在色谱分析时，等度洗脱和梯度洗脱各有优势和劣势。

优点

对于等度洗脱而言，由于方法运行时，流动相的比例不发生变化，所以它对仪器的要求不高，只需要一个单元泵就可以运行方法。
其次，由于等度洗脱条件单一，所以比较容易用来摸索方法设置，例如改变流动相比例，改变柱温等条件。
并且由于等度洗脱每次运行时的流动相比例相同，所以相同方法运行多个样品时，样品之间不需要设置平衡时间来让系统恢复到所需的流动相比例。
缺点

但是它也有缺点，那就是越往后出峰的组分色谱峰越宽。

并且大多数等度洗脱的方法分析时间较长。

但是它也有缺点，那就是越往后出峰的组分色谱峰越宽。

并且大多数等度洗脱的方法分析时间较长。

等度洗脱

?

优点

而梯度洗脱能够规避掉等度洗脱的问题，例如梯度洗脱的样品峰，无论先出峰还是后出峰的组分，它们的峰形基本都能保证尖锐对称。
其次由于梯度洗脱通常设置的流动相比例是让洗脱强度越来越强，这样能保证在较短的时间内，让样品中强保留组分也能被洗脱出来。
缺点

但是伴随着这些优点也会有对应的缺点，首先它对仪器的配置要求较高，通常需要配置四元泵或者二元泵。
其次它在每次运行样品之间，需要设置一定的平衡时间，来让系统中流动相的比例到达初始流动相比例。
最后，由于它的方法设置复杂，例如影响分离的有初始流动相比例、流动相的梯度变化、结束流动相比例、柱温箱温度等，所以方法的开发和优化会较为复杂。
对于常规样品而言，建议大家在初始设置方法时可以先参考以下初始条件运行：

20分钟内，将有机相比例从5-10%线性升高至100%，并保持一段时间以保证所有组分被洗脱出来。

?

如果在梯度结束后，有组分的洗脱时间超过梯度时间的25%，也就是该条件中如果有化合物在25分钟之后被洗脱出来，则需要考虑更换保留能力更弱的色谱柱或更换极性更强的有机溶剂。

我们可以通过以下公式来计算：



我们可以看出 ΔtG>0.25 tG，所以该方法不适合等度洗脱。

适合等度洗脱的方法要求 ΔtG<0.25tG。

了解一下相关知识

应助达人

楼主，1.等度洗脱是指在样品组分的分析周期中，流动相的组成比例和流速恒定不变的洗脱方式。梯度洗脱是指在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比的洗脱方式。
2.对于等度洗脱而言，由于方法运行时，流动相的比例不发生变化，所以它对仪器的要求不高，只需要一个单元泵就可以运行方法。

其次，由于等度洗脱条件单一，所以比较容易用来摸索方法设置，例如改变流动相比例，改变柱温等条件。

并且由于等度洗脱每次运行时的流动相比例相同，所以相同方法运行多个样品时，样品之间不需要设置平衡时间来让系统恢复到所需的流动相比例。

3.梯度洗脱能够规避掉等度洗脱的问题，例如梯度洗脱的样品峰，无论先出峰还是后出峰的组分，它们的峰形基本都能保证尖锐对称。

其次由于梯度洗脱通常设置的流动相比例是让洗脱强度越来越强，这样能保证在较短的时间内，让样品中强保留组分也能被洗脱出来。