方法开发应该怎么做呀？

应助达人

这梯度..............跟等度也没啥区别了呀，而且峰几乎全部都5min前出来了，不合适

应助达人

方法开发是一个要求前期准备比较充足的过程，首先要对自己测试的化合物的化学性质有所了解，然后根据化合物类型来选择合适的色谱柱。对于未知的物质，一开始就建议用C18长柱，250mm的，C18柱在液相分析中适用于大多数物质。选好色谱柱后就是流动相，如果你能找到类似的文献作为参考就再好不过了，楼主的梯度洗脱变化范围太小，建议初始低有机相，高水相，比如95%甲醇，5%磷酸水溶液，然后慢慢提高有机相，最后再恢复至初始比例进行平衡。

应助达人

摸条件的时候可以把洗脱程序设置长一点，确保所有目标物均出峰，到后期可以再优化缩短分析时间。