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中药颗粒剂中连翘苷含量测定方法验证

上党之巅

2024/09/03
菜鸟分析队

私聊

中药/天然药检测

中药颗粒剂中连翘苷含量测定方法验证

1 系统适用性与专属性

（1）溶液配制

空白溶剂：甲醇

对照品贮备液：取连翘苷对照品约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。（浓度约为0.5mg/ml）

对照品溶液1：取对照品贮备液8ml，精密量取，置20ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。（浓度约为0.2mg/ml）

对照品溶液2：取连翘苷对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。（浓度约为0.2mg/ml）

供试品溶液：使用“重复性”项下供试品溶液。

阴性样品溶液：取本品研细，取连翘阴性样品约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理（功率500W，频率40kHz）25分钟，取

出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

表1系统适用性-称样量

样品名称	对照品	供试品	阴性样品
称样量（g）	①0.02566 ②0.01029	2.0040	1.0024

（2）结果报告

表2 进样精密度测试结果

名称	保留时间（min）	峰面积
对照品溶液1	53.639	1246.25
对照品溶液2	53.421	1215.61
对照品溶液3	53.864	1216.42
对照品溶液4	53.292	1220.63
对照品溶液5	52.629	1222.57
均值	53.369	1224.30
RSD（%）	0.88	1.03

表3专属性测试结果

名称	主峰保留时间（min）	理论板数	拖尾因子	分离度
对照品溶液	53.639	7278	1.15	/
供试品溶液	52.315	10366	1.31	7.3

（3）结论

空白溶剂、阴性样品溶液均不干扰连翘苷测定；

对照品溶液连续测试5针，峰面积RSD为1.03%，不大于5.0%；保留时间RSD为0.88%，不大于2.0%；

供试品溶液中，连翘苷理论板数为10366，不低于3000，拖尾因子为1.31，不大于2.0；连翘苷色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度为7.3，不小于1.5。

2 线性和范围

（1）溶液配制

空白溶剂：甲醇

对照品贮备液：用“系统适用性与专属性”项下。

线性溶液1（25%）：精密量取对照品贮备液0.5ml，置5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。（浓度约为50μg/ml）

线性溶液2（50%）：精密量取对照品贮备液1ml，置5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。（浓度约为100μg/ml）

线性溶液3（100%）：精密量取对照品贮备液2ml，置5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。（浓度约为200μg/ml）

线性溶液4（200%）：精密量取对照品贮备液4ml，置5ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。（浓度约为400μg/ml）

线性溶液5（250%）：取对照品贮备液。（浓度约为500μg/ml）

（2）结果报告
表4线性测试结果

（3）结论

连翘苷在供试品浓度49.1646g/ml~491.6456μg/ml浓度范围内，线性相关系数r为1，不小于0.99；各浓度点响应因子RSD为0.71%，不大于5.0%；y轴截距不大于100%浓度峰面积的0.78%，不大于3.0%。

3 准确度

（1）溶液配制

空白溶剂：甲醇

对照品贮备液：用“系统适用性与专属性”项下。

100%回收率溶液：本品研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入对照品贮备液4ml，加入甲醇6ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理（功率500W，频率40kHz）25分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。（平行配制6份）

表5准确度-称样量

名称	称样量（g）
供试品	100%回收率溶液①1.0042 ②1.0038 ③1.0054④1.0044 ⑤1.0051 ⑥1.0056

（2）结果
表6准确度测试结果

序号	称样量（g）	供试品含量（mg）	对照品加入量（mg）	测得量（mg）	回收率（%）	平均回收率（%）	RSD（%）
1	1.0042	1.0489	1.9666	2.9857	98.48	99.69	2.10
2	1.0038	1.0485		2.9868	98.56
3	1.0054	1.0502		2.9695	97.59
4	1.0044	1.0492		2.9933	98.86
5	1.0051	1.0499		3.0593	102.18
6	1.0056	1.0504		3.0658	102.48

（3）结论

6份100%回收率溶液回收率在97.59% ~102.48%范围内，均在90.0% ~110.0%之间，6份回收率RSD为2.10%，不大于5.0%。

4 重复性

（1）溶液配制

空白溶剂：甲醇

供试品溶液：本品研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理（功率500W，频率40kHz）25分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。（平行配制6份）

表7 重复性-称样量

名称	称样量（g）
供试品	①2.0039②2.0049③2.0034④2.0043⑤2.0050⑥2.0040

（2）结果

表8 重复性测试结果

供试品	含量（mg / g）	平均含量（mg / g）	RSD（%）
1	1.050	1.05	0.26
2	1.046
3	1.049
4	1.052
5	1.049
6	1.054

（3）结论

6份供试品溶液含量结果RSD为0.26%，不大于3.0%。

5 中间精密度

不同分析人员，使用不同仪器、在不同时间进样测试，平行制备6份供试品溶液，与重复性结果进行比较，考察6份供试品溶液测定结果与重复性项下6份供试品的含量。

（1）溶液配制

空白溶剂：甲醇

对照品溶液：配制同“系统适用性与专属性”项下。

供试品溶液：配制同“重复性”项下。

表9 中间精密度-称样量

名称	称样量
对照品	①0.01039g②0.01037g
供试品	①2.0037g②2.0043g③2.0045g④2.0029g⑤2.0040g⑥2.0044g

（2）结果报告

表10精密度测试结果

/	供试品	含量（mg/g）	含量（mg/g）	平均含量（mg/g）	RSD （%）	RSD （%）
人员：实验员甲仪器：01 日期：2024年04月10日	1	1.050	1.05	1.05	0.26	1.30
	2	1.046
	3	1.049
	4	1.052
	5	1.049
	6	1.054
人员：实验员乙仪器：02 日期：2024年04月24日	1	1.062	1.05		1.89
	2	1.035
	3	1.077
	4	1.072
	5	1.041
	6	1.031

（3）结论

不同分析人员、使用不同仪器、在不同时间进样测试，6份供试品溶液中连翘苷含量测定结果RSD为1.89%，不大于3.0%；与重复性比较，12份供试品溶液中连翘苷含量测定

结果RSD为1.30%，不大于5.0%。

6 溶液稳定性

分别考察供试品溶液和对照品溶液在室温条件下放置0h、4h、8h、12h、16h、20h、24h、28h、32h、36h、40h、44h、48h后含量变化情况，为检测时供试品溶液和对照品溶

液的放置时间提供依据。

（1）溶液配制

空白溶剂：甲醇

对照品溶液：配制同“系统适用性与专属性”项下。

供试品溶液：配制同“系统适用性与专属性”项下。

取对照品溶液考察系统稳定性、对照品溶液稳定性；取供试品溶液考察供试品溶液稳定性。

表11 溶液稳定性-称样量

名称	称样量
对照品	0.01005g
供试品	2.0060g

（2）结果报告

表12对照品溶液稳定性测试结果

时间（h）	连翘苷峰面积	相对0h峰面积（%）
0	1208.55	/
4	1189.17	98.40
8	1231.77	101.92
12	1231.98	101.94
16	1213.03	100.37
20	1222.82	101.18
24	1234.02	102.11
28	1222.20	101.13
32	1230.63	101.83
36	1232.71	102.00
40	1244.17	102.95
44	1249.25	103.37
48	1244.76	103.00
RSD（%）	1.34	1.32

表13 供试品溶液稳定性测试结果

时间（h）	连翘苷峰面积	相对0h峰面积（%）
0	1295.66	/
4	1289.85	99.55
8	1308.42	100.98
12	1298.07	100.19
16	1270.04	98.02
20	1319.49	101.84
24	1280.52	98.83
28	1274.57	98.37
32	1304.34	100.67
36	1300.28	100.36
40	1305.75	100.78
44	1306.48	100.84
48	1305.31	100.74
RSD（%）	1.11	1.16

（4）可接受标准

对照品溶液室温放置48小时，不同时间点峰面积相对0小时峰面积百分比在98.40%~103.37%范围内，均在95.0% ~105.0%之间，表明对照品溶液稳定；供试品溶液室温放置48

小时，不同时间点峰面积相对0小时峰面积百分比在98,37%~101.84%范围内，均在95.0% ~105.0%之间，表明供试品溶液稳定。

7 耐用性

考察色谱条件发生微小变动时，检测方法的耐受程度。

（1）变动的色谱条件

表14耐用性试验参数

参数	规定值	变动的范围	建议变动的范围
流速（ml/min）	1.0	±0.1	0.9、1.1
流动相比例(%)	乙腈-水（18:82）	±1	乙腈-水（17:83）乙腈-水（19:81）
柱温（℃）	35	±1℃	34、36
波长（nm）	277	±2	275、279
色谱柱	ZORBAX Eclipse XDB-C18 (4.6mm×250mm，5μm)	ZORBAX Eclipse XDB-C18 (4.6mm×250mm，5μm)	/

（2）溶液配制

空白溶剂：甲醇

对照品溶液：配置同“系统适用性与专属性”项下。

供试品溶液：本品研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，称定重量，超声处理（功率500W，频率40kHz）25分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。（平行配制2份）

表15 耐用性-称样量

名称	对照品（mg）	供试品（g）
标准条件	①0.01025g②0.01031g	①2.0015g②2.0012g
275nm
279nm
流速0.9ml/min	①0.01084g②0.01093g	①2.0013g②2.0019g
流速1.1ml/min
流动相比例17：83
流动相比例19：81	①0.01114g②0.01036g	①2.00321g②2.0042g
柱温34℃	①0.01036g②0.01033g	①2.0034g②2.0028g
柱温36℃
色谱柱1

（2）结果

表16 耐用性测试结果

/	对照品溶液			供试品溶液	/
/	保留时间	理论板数	拖尾因子	含量（mg /g）	与标准条件含量差值（%）
标准条件	53.561	11324	1.13	1.04	/
流速：0.9ml/min	48.350	9120	1.50	1.01	2.88
流速：1.1ml/min	39.392	8476	1.53	1.02	1.92
柱温：34℃	55.256	8203	1.41	1.04	0.00
柱温：36℃	53.727	8019	1.55	1.03	0.96
275nm	53.560	11320	1.14	1.05	0.96
279nm	53.559	11359	1.13	1.04	0.00
流动相比例17：83	54.797	9273	1.57	1.03	0.96
流动相比例19：81	41.790	9036	1.53	1.03	0.96
色谱柱1	55.594	6246	1.13	1.06	1.92

注：流速0.9ml/min、流速1.1ml/min、流动相比例17:83三个条件保留时间参考中间精密度保留时间。

（5）可接受标准

不同条件下：

空白溶剂不干扰连翘苷峰检测；

对照品溶液中连翘苷理论板数均不低于3000，拖尾因子均不大于2.0；

含量结果与标准条件比较，最大差值为2.88，均不大于5%。

8、连翘苷含量测定验证结果：