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HPLC（高效液相色谱法）流动相如何选择

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2024/09/05

液相色谱（LC）

HPLC（高效液相色谱法）流动相的选择是一个需要综合考虑多个因素的过程。如下是最近统计出的影响因素，仅代表个人观点 1. 样品的性质

极性：
- ①样品的极性直接决定了流动相中溶剂的选择。极性样品更容易溶解在极性溶剂中，非极性样品则更易溶于非极性溶剂。
- ②对于极性样品，如氨基酸、肽类，常选择甲醇-水或乙腈-水作为流动相，因为这些溶剂具有一定的极性，可以很好地溶解这些样品。
- 溶解度：
- ①流动相需要能够充分溶解样品，否则样品可能会在色谱柱内沉淀，影响分离效果。
- ②对于溶解度较低的样品，如某些脂溶性化合物，可能需要加入适量的有机溶剂（如甲醇、乙腈）来提高其在流动相中的溶解度。
稳定性：
- ①样品在流动相中的稳定性至关重要，因为不稳定的样品可能会在色谱柱内分解或发生其他化学反应。
- ②对于易氧化的样品，如某些维生素，可能需要选择含有抗氧化剂的流动相，或者在分析过程中通入氮气等惰性气体来保护样品。
2. 分离效果

流动相与固定相之间的相互作用：
- ①流动相与固定相之间的相互作用力（如氢键、范德华力等）会影响样品在色谱柱上的保留时间和分离效果。
- ②在反相色谱中，流动相通常含有一定比例的有机溶剂（如甲醇、乙腈），这些溶剂与固定相（如C18、C8等）之间的相互作用力较弱，使得极性物质在色谱柱上的保留时间较短，从而实现快速分离。
- 3. 色谱柱类型
色谱柱的极性：
- ①不同类型的色谱柱对流动相的要求不同。例如，反相色谱柱通常使用含有一定比例有机溶剂的流动相，而正相色谱柱则可能需要使用含有一定比例极性溶剂的流动相。
- ②对于C18反相色谱柱，常使用甲醇-水或乙腈-水作为流动相；而对于硅胶正相色谱柱，则可能需要使用水与有机溶剂（如正己烷、异丙醇等）的混合物作为流动相。
4. 检测器类型

与检测器的兼容性：
- ①流动相的选择还需要考虑与检测器的兼容性。例如，紫外检测器要求流动相具有较好的透光性；质谱检测器则要求流动相中的溶剂尽可能挥发且不产生干扰离子。
- ②对于紫外检测器，可以选择甲醇-水或乙腈-水作为流动相，因为这些溶剂在紫外区有较好的透光性；而对于质谱检测器，则需要选择低沸点、易挥发的溶剂（如甲醇、乙腈）作为流动相，以减少对质谱仪的污染。
5. 其他因素

纯度、过滤、脱气、稳定性：
- ①流动相的纯度、过滤、脱气和稳定性都是确保HPLC分析准确性和可靠性的重要因素。高纯度的流动相可以避免杂质对分析结果的影响；过滤可以去除流动相中的颗粒物和微生物；脱气可以防止气泡对色谱峰形的影响；稳定性则确保了在长时间使用过程中流动相的质量保持不变。
- ②使用前应对流动相进行过滤和脱气处理，以确保其纯度和稳定性。对于需要长时间使用的流动相，应定期检查其质量并在必要时进行更换。

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