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HPLC(高效液相色谱法)流动相如何选择
p3203140
2024/09/05
私聊
液相色谱(LC)
HPLC
(高效
液相色谱
法)流动相的选择是一个需要综合考虑多个因素的过程。如下是最近统计出的影响因素,仅代表个人观点
1. 样品的性质
极性:
①样品的极性直接决定了流动相中溶剂的选择。极性样品更容易溶解在极性溶剂中,非极性样品则更易溶于非极性溶剂
。
②
对于极性样品,如氨基酸、肽类,常选择甲醇-水或乙腈-水作为流动相,因为这些溶剂具有一定的极性,可以很好地溶解这些样品。
溶解度:
①
流动相需要能够充分溶解样品,否则样品可能会在色谱柱内沉淀,影响分离效果。
②
对于溶解度较低的样品,如某些脂溶性化合物,可能需要加入适量的有机溶剂(如甲醇、乙腈)来提高其在流动相中的溶解度。
稳定性:
①样品在流动相中的稳定性至关重要,因为不稳定的样品可能会在色谱柱内分解或发生其他化学反应。
②
对于易氧化的样品,如某些维生素,可能需要选择含有抗氧化剂
的流动相,或者在分析过程中通入氮气等惰性气体来保护样品。
2. 分离效果
流动相与固定相之间的相互作用:
①流动相与固定相之间的相互作用力(如氢键、范德华力等)会影响样品在色谱柱上的保留时间和分离效果。
②
在反相色谱中,流动相通常含有一定比例的有机溶剂(如甲醇、乙腈),这些溶剂与固定相(如C18、C8等)之间的相互作用力较弱,使得极性物质在色谱柱上的保留时间较短,从而实现快速分离。
3. 色谱柱类型
色谱柱的极性:
①不同类型的色谱柱对流动相的要求不同。例如,反相色谱柱通常使用含有一定比例有机溶剂的流动相,而正相色谱柱则可能需要使用含有一定比例极性溶剂的流动相。
②
对于C18反相色谱柱,常使用甲醇-水或乙腈-水作为流动相;而对于硅胶正相色谱柱,则可能需要使用水与有机溶剂(如正己烷、异丙醇等)的混合物作为流动相。
4. 检测器类型
与检测器的兼容性:
①流动相的选择还需要考虑与检测器的兼容性。例如,紫外检测器要求流动相具有较好的透光性;质谱检测器则要求流动相中的溶剂尽可能挥发且不产生干扰离子。
②
对于紫外检测器,可以选择甲醇-水或乙腈-水作为流动相,因为这些溶剂在紫外区有较好的透光性;而对于质谱检测器,则需要选择低沸点、易挥发的溶剂(如甲醇、乙腈)作为流动相,以减少对质谱仪的污染。
5. 其他因素
纯度、过滤、脱气、稳定性:
①流动相的纯度、过滤、脱气和稳定性都是确保HPLC分析准确性和可靠性的重要因素。高纯度的流动相可以避免杂质对分析结果的影响;过滤可以去除流动相中的颗粒物和微生物;脱气可以防止气泡对色谱峰形的影响;稳定性则确保了在长时间使用过程中流动相的质量保持不变。
②
使用前应对流动相进行过滤和脱气处理,以确保其纯度和稳定性。对于需要长时间使用的流动相,应定期检查其质量并在必要时进行更换。
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