[第十七届原创]动物性食品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺的测定

我是风儿

2024/10/06
农检联合队

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兽药/抗生素检测

动物性食品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺的测定

摘要：本文通过对以下涉及酰胺醇类兽药的检测标准：GB 31658.2-2021《食品安全国家标准动物性食品中氯霉素残留量的测定液相色谱－串联质谱法》、 GB 31658.5-2021《食品安全国家标准动物性食品中氯霉素残留量的测定液相色谱－串联质谱法》、GB 31656.16-2022《食品安全国家标准水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量的测定气相色谱法》、GB 31658.20-2022《食品安全国家标准动物性食品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》进行方法比较，下表梳理了这4个标准的标准号、目标物、前处理方式、检测仪器。

01：想要做好方法优化，就要熟悉目标物的化学结构和化学性质。

从结构上看：

（1）含有苯环，可采用反相C₁₈色谱柱分离；

（2）按照极性大小顺序，氟苯尼考胺>甲砜霉素>氟苯尼考>氯霉素，因此在反相色谱柱上，这4个化合物的出峰时间则为氟苯尼考胺<甲砜霉素<氟苯尼考<氯霉素；

（3）含有-NH₂、-NH-等碱性基团，可采用MCX固相萃取柱进行净化。

02：标准能否整合？

答案显而易见，因为GB 31656.16-2022和GB 31658.20-2022这两个标准就是一次测了以上4种酰胺醇类兽药，因此这4种物质是可以合起来检测的。从检测目标物数量、前处理过程、检测仪器类型来看，GB 31658.20-2022更全、更简单。

03：哪种提取效果更好？

以上标准中，GB 31658.2-2021号标准采用乙腈提取，GB 31658.5-2021、GB 31656.16-2022、GB 31658.20-2022标准均采用的氨化乙酸乙酯，针对这两种溶剂作对比：

从上表中，我们无法确切地说哪一种溶剂更好，需要检测人员综合考虑检测基质及实验室效率等因素做出判断。如简单基质，可采用氨化乙酸乙酯提取。

04：哪种净化方式更佳，能否简化？

以上标准中，GB 31658.2-2021、GB 31658.5-2021、 GB 31656.16-2022 标准均采用SPE柱净化方式， GB 31658.20-2022标准则仅仅采用了液液萃取的方式。不论从成本、操作时间、操作难度都是GB 31658.20-2022标准更优。但液液萃取的净化效果是比不上SPE柱的，如果样品较复杂，或者采用GB 31658.20-2022（如鸡肉样品基质）标准效果不理想的时候，建议更换方法。

GB 31658.2-2021标准解读

标准解读

提取步骤改进总结

3、国标GB 31658.2-2021的离子对参数

总结：

GB 31658.5-2021标准解读

做好GB 31658.5 的要点：pH

pKa:酸性化合物解离常数（Ka）的负对数

离子交换柱的选择

阳离子交换柱：（离子交换：借助于固体离子交换剂中的离子与稀溶液中的离子进行交换，以达到提取或去除溶液中某些离子的目的）

净化：MCX固相萃取柱：依次用甲醇2mL和水2mL活化。备用液过柱，用5%乙酸2mL淋洗，用10%氨甲醇 5mL洗脱。收集洗脱液，于40℃氮气吹干。用30%乙腈水溶液500μL溶解残余物，滤膜过滤，供超高效液相色谱-串联质谱测定。

注释：MCX阳离子交换柱其作用力为离子吸附，吸附的目标物为碱性化合物，上样时pH要低于2个单位目标物的pKa（10.4）（所以要加5%乙酸2mL调pH），洗脱时pH值要高于目标物2个单位的pKa。

实验谱图

GB 31658.5-2021《食品安全国家标准动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定液相色谱－串联质谱法》做好这个实验的要点：pH的控制；MCX阳离子交换作用机理；基质配标曲的方式这三方面来讲述了应用GB 31658.5-2021检测氟苯尼考及氟苯尼考胺的注意事项。

GB 31658.20-2022标准解读

标准中内标的影响：

（1）标准中甲砜霉素内标、氟苯尼考内标的离子对信息：

甲砜霉素、氟苯尼考目标物含有标准中相对应同位素内标的离子对信息

去除目标物对内标物的干扰

选择方案2效果更好

因此：要注意内标物的选择及内标浓度的选择