1)使用前: a. 检查色谱柱完整性:在安装色谱柱之前,检查色谱柱是否有任何可见的损坏,如划痕、破碎的填料或损坏的柱接头。损坏的色谱柱可能会导致峰形异常或无法达到预期的分离效果。 b. 阅读说明书:仔细阅读色谱柱的使用说明书,了解色谱柱的pH稳定性范围、最大操作压力、溶剂兼容性等参数。这些信息对于确保色谱柱在最佳条件下运行至关重要。 c. 溶剂置换:新色谱柱或长时间未使用的色谱柱,需要用推荐溶剂进行充分的溶剂置换,以确保色谱柱达到最佳状态。通常,这涉及到使用一定比例的水和有机溶剂的混合物。 2)使用中: a. 流动相选择:选择与色谱柱兼容的流动相,避免使用会引起固定相破坏的溶剂。例如,某些手性固定相对水敏感,可能需要避免高比例的水相。b. 样品溶解性:样品应溶解在与流动相组成相似的溶剂中,以减少样品在色谱柱上的保留时间差异。这有助于提高分离效率和重复性。 c. 色谱柱平衡:在开始进样前,用足够的流动相平衡色谱柱,确保色谱柱达到稳定状态。这对于获得可重复的分离结果至关重要。 d. 色谱柱温度:控制色谱柱的温度,因为温度的变化可能会影响分离效果。手性色谱柱通常对温度变化敏感,因此需要在恒定温度下操作。 e. pH控制:对于对pH敏感的手性化合物,需要调整流动相的pH值,以获得更好的保留和分离效果。pH值的变化可能会影响手性固定相的电荷状态,从而影响分离。(一般不超过7) f. 色谱柱压力:避免超过色谱柱的最大使用压力,以防止柱床压缩或填料损坏。高压力可能会导致色谱柱性能下降或损坏。 3)使用后: a. 柱子清洗:分析完成后,使用适当的溶剂清洗色谱柱,以去除可能吸附在柱上的样品或杂质。这有助于防止柱性能下降和交叉污染。 b. 柱子保存:短期内不使用色谱柱时,应将其保存在推荐的溶剂中,如100%甲醇或乙醇。这有助于防止固定相的干涸。 c. 记录使用情况:记录色谱柱的使用情况,包括分析的样品、使用条件和色谱柱表现,以便于追踪柱效和寿命。这对于计划维护和更换色谱柱非常重要。 4)其他注意事项: a. 避免强酸碱:不要使用强酸性或强碱性的溶剂,因为这可能会破坏手性固定相。某些手性固定相可能对pH值非常敏感。 b. 避免高温:不要长时间在高温下使用色谱柱(如超过40℃),除非色谱柱说明书中特别指明可以承受高温。高温可能会加速固定相的降解。 c. 避免长时间储存:长时间储存可能会影响色谱柱的性能,建议定期使用和维护。定期的活动可以帮助维持色谱柱的活性和分离性能。