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高效液相色谱基础篇|关于色谱柱活化的小知识 原创 紫川Vern 磊哥研学社 2024年10月08日 06:48 福建
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2024/10/14
私聊
液相色谱(LC)
今天讲一讲有关色谱柱活化的过程,我们常常拿到一个新的色谱柱,想都不想的就直接检测,往往在开始用的前面几针会出现一些神奇的东西,这大多数是没有将色谱柱活化好或者平衡好。
01.活化的目的
1)去除保存液:
色谱柱在出厂时通常都会用特定的溶剂(如甲醇、乙腈等)保存。活化过程中,这些保存液需要被去除,因为它们可能会干扰后续的色谱分析。
2)去除杂质:
在色谱柱的生产、运输或储存过程中,可能会有杂质吸附在柱内。活化有助于清除这些杂质,确保分析结果的准确性。
3)稳定柱性能:
通过活化,可以使色谱柱的填料重新分布均匀,从而保证色谱柱的性能稳定,提高分离效率。
4)平衡柱床:
活化有助于使色谱柱内部的填料达到适当的溶剂平衡状态,减少柱床的压缩,提高柱效。
5)提高重现性:
通过活化,可以确保色谱柱在不同的分析批次中提供一致的性能,从而提高分析结果的重现性。
02.活化的方法
1)溶剂冲洗法:
使用强极性溶剂(如甲醇或乙腈)冲洗色谱柱,以去除残留的保存液和杂质。也
可以使用梯度洗脱的方式,逐渐增加有机溶剂的比例,直至与分析所用流动相一致。
2)流动相平衡法:
在使用新色谱柱或更换色谱柱后,用实际分析所用的流动相平衡色谱柱,确保柱性能稳定。
3)样品平衡法:
在使用新色谱柱或更换色谱柱后,用实际分析所用的样品平衡色谱柱,确保色谱柱在分析样品之前已经达到了适当的平衡状态,特别是当分析的化合物与色谱柱的固定相有较强的相互作用时。
03.活化的步骤(参考)
1)准备阶段:
确认色谱柱的类型和规格,了解色谱柱的保存液、pH稳定性范围和最高耐压。
准备所需的溶剂,如甲醇、乙腈等。
2)润湿色谱柱:
将色谱柱安装到HPLC系统上,确保流向箭头正确。用色谱柱保存液冲洗色谱柱,以避免直接用有机溶剂导致柱填料干枯。
3)溶剂冲洗:
使用与色谱柱保存
液相
容的强极性溶剂(如甲醇或乙腈)以低流速冲洗色谱柱,然后逐渐提高流速。
4)流动相平衡:
使用实际分析所用的流动相通过色谱柱,直到压力和基线稳定。
5)柱效测试:
进行柱效测试,以确保色谱柱活化后的性能。
(一般柱效在前面的活化过程中,柱效测试基本都可以达到要求,但我还是建议你用样品再平衡几针)
6)样品平衡:
采用样品平衡法,使用样品或含有类似化合物的溶液通过色谱柱,以预先占据柱中的活性位点。
7)保存:
活化后,如果色谱柱暂时不使用,需要将其保存在合适的溶剂中,通常是高比例的有机相,如甲醇或乙腈。
8)记录:
记录活化过程中的所有参数,包括溶剂类型、流速、体积和时间,以备后续参考。
04.活化的注意事项
1)仔细阅读说明书:
在活化之前,仔细阅读色谱柱的使用说明书,了解制造商推荐的活化方法和溶剂。
2)正确安装色谱柱:
确保色谱柱正确安装在
液相色谱
系统中,流向箭头与流动相流向一致。
3)避免干柱:
防止色谱柱干燥,因为干燥可能导致填料结构变化,影响柱性能。
4)使用兼容溶剂:
使用与色谱柱兼容的溶剂进行活化,避免使用会引起柱填料破坏的溶剂。
5)控制流速:
在活化过程中,逐渐增加流速,避免一开始就使用高速,这可能会对柱床造成冲击。
6)充分平衡:
确保色谱柱在开始样品分析前已经充分平衡,以保证重现性和稳定性。
7)活化后检查
:
活化后,通过运行测试样品来检查色谱柱的性能,确保活化效果。
总结一下:
活化色谱柱是确保分析结果准确性的重要步骤。简单来说,就是通过一系列溶剂冲洗和样品平衡,去除色谱柱内的保存液和杂质,稳定柱性能,并确保每次分析时色谱柱都处于最佳状态。
首先,我们要用保存液预湿新柱,然后用强极性溶剂如甲醇或乙腈进行冲洗,接着用实际分析所用的流动相或样品溶液进行平衡,直到色谱柱完全准备好进行分析。
记得,在整个过程中要温柔对待色谱柱,避免高速冲洗和压力过大,最后别忘了在使用前后都要正确保存色谱柱。每一步都要记录详细,这样不仅有助于问题的排查,也能确保色谱柱的长期稳定使用。
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