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做实验时如何预防违规操作?
Ins_f07de2bb
2024/10/21
私聊
原创大赛公告
我最开始跟着师兄细胞的时候,一点儿不懂,总错,我就写了非常详细的操作步骤,然后在脑子里不断重复,结果就顺利学会了,只是开始操作慢,熟悉了就快!这是我之前写的操作步骤:
1.
准备
(
1
)实验前
30min
,打开紫外灯,正式实验时关闭紫外灯,打开风机
(
2
)穿实验服,戴手套,酒精擦手,擦拭培养基瓶、
PBS
瓶、胰酶瓶、血清瓶以及废液缸外壁,放入超净台
2.
弃液
(
1
)取出培养瓶(皿),酒精擦拭外壁,放入超净台
(
2
)酒精擦手,进入超净台
(
3
)开盖,将盖至于火焰正前方,右手将培养液倒入废液缸
(
4
)培养基盖(皿)过火,盖上培养瓶(皿)
3.
冲洗
(
1
)取
5ml
枪,安装
5ml
枪头,枪头朝对面,置于左手边枪头盒上备用
(
2
)取
PBS
,撕下封口膜,过火,开盖,盖置于高处
(
3
)取
5ml
枪,取
2ml
左右
PBS
,加入培养皿或培养瓶中
(
4
)盖上瓶盖(皿盖),弃掉枪头,枪头朝对面,置于左手边枪头盒上备用,轻轻晃动培养瓶(皿),让
PBS
没过瓶底
(
5
)开盖,右手弃掉
PBS
(
6
)瓶盖(皿盖)过火,盖上培养瓶(皿)
(
7
)
PBS
瓶盖瓶口过火,盖上
PBS
瓶盖,置于左手酒精灯旁
4.
消化
(
1
)取
5ml
枪头,安装
5ml
枪头,调节示数为
2ml
,枪头朝向对面,置于左手边枪头盒上备用
(
2
)取胰酶瓶,撕封口膜,瓶口过火后开盖,盖置于高处
(
3
)取
5ml
枪,取
2ml
胰酶,分别小心(不要直接打到细胞上)加入到各培养瓶中(个数据情况而定),计时
2min
(
4
)带着
5ml
枪头,将
5ml
枪,枪头朝向对面,置于左手边枪头盒上备用
(
5
)胰酶瓶口和瓶盖过火后盖好,同
PBS
置于左手酒精灯旁
(
6
)将培养瓶盖(皿盖)过火后盖上
5.
取管
(
1
)右手拿出铝制饭盒,左手打开
(
2
)镊子过火,取出一支
15ml
离心管和离心管盖(传代
+
铺板的话就得取出多只离心管),置于离心管架中
(
3
)用手离心管盖轻轻放在离心管上,不用拧紧
6.
终止消化
(
1
)取
1ml
枪,安装
1ml
枪头,置于左手边备用(如果血清太少,枪头伸不进去,就用
5ml
枪头取血清)
(
2
)取血清,撕下封口膜,过火,开盖置于离心管架中备用,盖置于高处
(
3
)打开培养瓶盖
(
4
)取
1ml
枪,取几滴血清,加入到培养瓶(皿)中,终止消化
(
5
)枪头朝对面,将
1ml
枪置于左手边枪头盒上备用
(
6
)过火,盖上血清
7.
吹打
(
1
)打开备用的
15ml
离心管的盖,盖置于高处
(
2
)取
1ml
枪,吹打悬液,轻轻从培养瓶上方将悬液打出,让其自然流到培养瓶下方
(
3
)认真观察培养瓶壁的膜,吹打到膜消失为止
(
4
)吹打完成之后将培养瓶中悬液转移到备用的
15ml
离心管中
(
5
)弃掉枪头,将枪放回枪架上
(
6
)管盖过火之后将装有细胞悬液的离心管盖上
8.
离心
(
1
)用封口膜将装有细胞悬液的离心管封口
(
2
)拿出超净台配平
(
3
)
1500rpm
离心
5min
9.
洗瓶
(
1
)酒精擦拭双手,进入超净台工作区
(
2
)取
1ml
枪,安装
1ml
枪头,枪头朝对面,置于左手边枪头盒上备用
(
3
)取
PBS
瓶,瓶盖过火开盖
(
4
)取
1ml
枪,取
1-2mlPBS
,加至培养瓶(皿)中,冲洗
3
次后倒掉冲洗液
(
5
)将培养瓶盖(皿盖)过火后盖上
(
6
)弃掉枪头,枪放回枪架上
10.
配培养液
(
1
)取
5ml
枪,调节示数
3.5
,安上
5ml
枪头,置于左手边备用
(
2
)取
1ml
枪,安上
1ml
枪头,置于左手边备用,
1ml
枪用于取血清
(
3
)打开待传代的培养瓶盖
(
4
)取血清,撕下封口膜,开盖,盖过火后置于高处,用
1ml
枪取
1ml
血清(如枪头伸不进去就行
5ml
枪头),加入到各个待传代的培养瓶(皿)中,弃掉枪头,枪放回枪架上
(
5
)将血清盖和口过火后盖好,放回原处
(
6
)取培养基瓶,撕封口膜,过火开盖
(
7
)取
5ml
枪,用
5ml
枪取培养基,在每个待传代的培养瓶中加入
7ml
培养基(取两次
3.5ml
)
(
8
)将
5ml
枪,枪头朝对面,置于左手边枪头盒上备用(保留枪头)
(
9
)培养瓶口与盖过火后盖好
(
10
)培养基瓶口和盖过火后盖好,放回原处
(
11
)轻轻摇晃培养瓶(皿),使培养液没过瓶(皿)底
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