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MTT溶液配制方法及实验步骤
Ins_9c56682f
2024/10/21
私聊
原创大赛公告
日常中的
MTT
实验一般都是药敏实验和细胞增殖实验,实验的成功一般也和细胞铺板的均匀性,一致性及细胞活性惺惺相关。
MTT
溶液的配制方法:
1. MTT
溶液的配制方法:通常,此法中的
MTT
浓度为
5mg/ml
。因此,可以称取
MTT 0.5
克,溶于
100 ml
的磷酸缓冲液(
PBS
)或无酚红的培养基中,用
0.22μm
滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放
4℃
避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。
2.
配制
MTT
时用
PBS
(
pH=7.4
)溶解。
PBS
配方:
NaCl 8g
,
KCl 0.2g
,
Na2HPO4 1.44g
,
KH2PO4 0.24g
调
pH7.4
,定容
1L
。
药物
MTT
法实验步骤:
贴壁细胞:
1.
收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入
100ul
,铺板使待测细胞调密度
1000- 10000 /
孔,每次加入细胞的枪头贴着
96
孔的四周,旋转缓慢加入,加入细胞后可前后左右水平摇晃几下,以让细胞铺板更佳。
2. 5%CO2
,
37℃
孵育,至细胞单层铺满孔底(
96
孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上细胞贴壁后即可加药
.
一般
5-7
个梯度,每孔
100ul
,一行
12
个孔,两个
PBS
填充孔,两个对照孔,两个空白孔,
6
个复孔
3. 5%CO2
,
37℃
孵育
16-48
小时,倒置显微镜下观察。
4.
每孔加入
10ulMTT
溶液(
5mg/ml
,即
0.5%MTT
),继续培养
4h
。若药物与
MTT
能够反应,可先离心后弃去培养液,小心用
PBS
冲
2-3
遍后,再加入含
MTT
的培养液。
5.
终止培养,小心吸去孔内培养液。
6.
每孔加入
100ul
二甲基亚砜,置摇床上低速振荡
10min
,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪
OD490nm
处测量各孔的吸光值。
7.
同时设置调零孔(培养基、
MTT
、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、
MTT
、二甲基亚砜)。
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