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【讨论】如何解决梯度洗脱时的重现性？请赐教！

starer0002

2007/06/18

变梯度洗脱要求仪器试剂及环境很苛刻。我有一试验用LC-10ATVP，spd-10a，色谱乙腈（国产），磷酸（AR），二乙胺（AR），C18柱（瓦里安）250mm，215nm波长，灵敏度为满量程的25%，已经注意了初始比例流动相平衡，室温，空白基线，进样后再初始平衡，可还是不能精确地扣基线，造成图形无法分析。是否因为灵敏度过高，还是另有原因，如磷酸的纯度，请高人指点下！

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biotrandglobal

第1楼2007/06/18

楼主，你好象发错地方了吧？

另外，你的整个系统是没有太多的问题，只是乙腈的吸收波长如果用215nm，有点够戗。（即使磷酸的纯度，泵的稳定性，乙腈的纯度，温度等都很好，也会出现一些问题的，诸如你现在的问题。）
必须要用215nm吗？
用不同比例的乙腈来作梯度洗脱，如果用280nm的检测波长基线会好些，如果用低于250nm，就难有很好的基线了。
starer0002 发表:变梯度洗脱要求仪器试剂及环境很苛刻。我有一试验用LC-10ATVP，spd-10a，色谱乙腈（国产），磷酸（AR），二乙胺（AR），C18柱（瓦里安）250mm，215nm波长，灵敏度为满量程的25%，已经注意了初始比例流动相平衡，室温，空白基线，进样后再初始平衡，可还是不能精确地扣基线，造成图形无法分析。是否因为灵敏度过高，还是另有原因，如磷酸的纯度，请高人指点下！

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orionwei

第2楼2007/06/18

建议楼主多走几次空白溶剂，用梯度洗脱程序对色谱柱进行平衡，这样可能会好些

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