【求助】急于解快液相色谱的问题

问题不复杂，我替LZ贴在这里，供大家参考和解答：
免得转到下载页面，麻烦.. :）

我的高效液相色谱仪怎么啦
先是我发现我的提取物用同样的液相条件（85%水，15%有机相（iPrOH:THF=35:65）），同一根柱子C18来分析，样品中各组分出峰时间慢慢提前了。到了后来，我发现提取物中各组分根本就分不开，而且峰形很宽。这样我怀疑我的第一根柱子失效了。（以前，分离同样的样品重现性好，峰形也很好）
然后，我借了另一根C18柱，用它来分析样品。在测试时，我用到了两个样品：一个是甲苯的甲醇溶液，另一个是5ppm的染料木素的甲醇溶液。平衡好后用20%的水，和80%的甲醇来分析样品，两者在6分钟内都有峰，峰形也还好。但是随着我调整流动相的比例至水到40%时，测试染料木素发现：染料木素出峰只往后推迟4分钟，而且基线很高（峰前或峰后都我的高效液相色谱仪怎么啦
先是我发现我的提取物用同样的液相条件（85%水，15%有机相（iPrOH:THF=35:65）），同一根柱子C18来分析，样品中各组分出峰时间慢慢提前了。到了后来，我发现提取物中各组分根本就分不开，而且峰形很宽。这样我怀疑我的第一根柱子失效了。（以前，分离同样的样品重现性好，峰形也很好）
然后，我借了另一根C18柱，用它来分析样品。在测试时，我用到了两个样品：一个是甲苯的甲醇溶液，另一个是5ppm的染料木素的甲醇溶液。平衡好后用20%的水，和80%的甲醇来分析样品，两者在6分钟内都有峰，峰形也还好。但是随着我调整流动相的比例至水到40%时，测试染料木素发现：染料木素出峰只往后推迟4分钟，而且基线很高（峰前或峰后都有一个大大的山包），重复进样结果都是一样的。我怀疑是水的问题，但我用超纯水新蒸的亚沸水测试还是一样。用20%的水，和80%的甲醇进空白的甲醇分析时没有出现的倒峰，而用40%的水和60%的甲醇分析时空白样品时基本是倒峰。另外，我发现整个分析过程中仪器压力偏高。
我找了第三根柱子，用40%的水和60%的甲醇分析甲醇空白时一样是严重的倒峰（最大的负吸收达到了30000uA）。同样仪器压力也偏高。
仪器的问题出在哪里呢？
有一个大大的山包），重复进样结果都是一样的。我怀疑是水的问题，但我用超纯水新蒸的亚沸水测试还是一样。用20%的水，和80%的甲醇进空白的甲醇分析时没有出现的倒峰，而用40%的水和60%的甲醇分析时空白样品时基本是倒峰。另外，我发现整个分析过程中仪器压力偏高。
我找了第三根柱子，用40%的水和60%的甲醇分析甲醇空白时一样是严重的倒峰（最大的负吸收达到了30000uA）。同样仪器压力也偏高。
仪器的问题出在哪里呢？

[quote]原文由 dongnan 发表:问题不复杂，我替LZ贴在这里，供大家参考和解答：
免得转到下载页面，麻烦.. :）

谢谢一楼

提取物的分析，是很容易毁色谱柱的——因为用好些高极性物质是用通常溶剂洗不下来的，需要用高极性溶剂（如正己烷类的）来清洗，但像楼主的C18柱明显不能用正己烷类物质去清洗。

提取物用色谱分析，最好用薄层去分析；如果要用反相色谱分析，最好是用硅胶吸附掉高极性杂质后再去分析，这样可以保护柱子。

你的仪器压力偏高，是因为用的流动相黏度偏高造成的。

另外，如果你的色谱柱被高极性物质污染了，同样也会使柱压加大。

好象你的仪器本身是正常的，是样品分析设计出毛病了。

基本同意跑来跑去的说法,但我不知道正己烷是强极性物质,我一直认为它是没剂型的,呵呵
用THF做流动相对C18柱和PEEK管都不好,换种流动相好吗?

色谱柱的硅胶键合效率在42%左右,大部分硅胶还有活性,C18柱是中等极性柱,极性来自与硅胶.用THF做流动象会带来甲醇无法洗脱的极性物质留在硅胶表面,引起柱的极性变强,使和以前相同的色谱条件(流动相)的非极性物质提前