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高压液相色谱HPLC常见故障及排除方法

液相色谱(LC)

  • 诊状
    (一)保留时间变化
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.柱温变化 : 柱恒温
    2.等度与梯度间未能充分平衡 : 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱
    3.缓冲液容量不够 : 用>25mmol/L的缓冲液
    4.柱污染 : 每天冲洗柱
    5.柱内条件变化 : 稳定进样条件,调节流动相
    6.柱快达到寿命 : 采用保护柱
    (二)保留时间缩短
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.流速增加 : 检查泵,重新设定流速
    2.样品超载 : 降低样品量
    3.键合相流失 : 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向
    4.流动相组成变化 : 防止流动相蒸发或沉淀
    5.温度增加 : 柱恒温
    (三)保留时间延长
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.流速下降 : 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡
    2.硅胶柱上活性点变化 : 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱
    3.键合相流失 : 同前(二)3
    4.流动相组成变化 : 同前(二)4
    5.温度降低 : 同前(二)5
    (四)出现肩峰或分叉
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.样品体积过大 : 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%
    2.样品溶剂过强 : 采用较弱的样品溶剂
    3.柱塌陷或形成短路通道 : 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
    4.柱内烧结不锈钢失效 : 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品
    5.进样器损坏 : 更换进样器转子
    (五)鬼峰
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.进样阀残余峰 : 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗
    2.样品中未知物 : 处理样品
    3.柱未平衡 : 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱)
    4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配,用抗氧化剂
    5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量,用HPLC级的水
    (六)基线噪声
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气,加柱后背压
    2.污染(随机噪声) : 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂
    3.检测器灯连续噪声 : 更换氘灯
    4.电干扰(偶然噪声) : 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)
    5.检测器中有气泡 : 流动相脱气,加柱后背压
    (七)峰拖尾
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.柱超载 : 降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相
    2.峰干扰 : 清洁样品,调整流动相
    3.硅羟基作用 加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品
    4.同前(四)4 : 同前(四)4
    5.同前(四)3 5. : 同前(四)3
    6.死体积或柱外体积过大 : 连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管
    7.柱效下降 : 用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱
    (八)峰展宽
    可能的原因 : 解 决 方 法
    1.进样体积过大 : 同(四)1
    2.在进样阀中造成峰扩展 : 进样前后排出气泡以降低扩散
    3.数据系统采样速率太慢 : 设定速率应是每峰大于10点
    4.检测器时间常数过大 : 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%
    5.流动相粘度过高 : 增加柱温,采用低粘度流动相
    6.检测池体积过大 : 用小体积池,卸下热交换器
    7.保留时间过长 : 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱
    8.柱外体积过大 : 将连接管径和连接管长度降至最小
    9.样品过载 : 进小浓度小体积样品
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  • 第1楼2004/12/23

    谢谢了,我们了解了一些知识。

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    +关注 私聊
  • 第2楼2004/12/24

    1.操作环境条件: 温度:10—30℃; 相对湿度<80%; 最好是恒温、恒湿,远离高电干扰、高振动设备。
    2.高压泵的保养:
    1)使用流动相尽量要清洁;
    2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗;
    3)流动相交换时要防止沉淀;
    4)避免泵内堵塞或有气泡;
    3.进样器的保养:
    1)每次分析结束后,要反复冲洗进样口,防止样品的交叉污染;
    4.色谱柱的保养:
    1)柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动;
    2)当柱子和色谱仪联结时, 阀件或管路一定要清洗干净;
    3)要注意流动相的脱气;
    4)避免使用高粘度的溶剂作为流动相;
    5)进样样品要提纯;
    6)严格控制进样量;
    7)每天分析工作结束后,要清洗进样阀中残留的样品;
    8)每天分析测定结束后,都要用适当的溶剂来清洗柱;
    9)若分析柱长期不使用,应用适当有机溶剂保存并封闭;

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  • 第3楼2004/12/26

    多谢大虾!

    我这个门外汉进来就靠你们了!!

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  • 第5楼2005/01/20

    色谱工作者有这个论坛真好!

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  • 第7楼2005/01/21

    色谱工作者有这个论坛真好!

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  • 第11楼2005/02/13

    我也来支持一下。。。

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  • 第12楼2005/02/16

    长知识,我们这些新手全靠你们了。

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