【求助】请问HPLC测喹啉黄的色谱条件是什么？？

1 适用范围

本方法适用于测定发油等油类化妆品中色素。

2 原理

样品中色素经有机溶剂提取分离后，用吸收光谱和层析法进行比较判定。

3 试剂

3.1 吸附剂

3.1.1 柱层析用硅胶：100目，临用前于100℃干燥1小时。

3.1.2 薄层层析用硅胶。

3.2 薄层板：用吸附剂（3.1.2）调节制成250～300?m的薄层，100℃加热活化1小时。

3.3 层析用滤纸：将滤纸浸渍在液体石腊5g溶于石醚100ml的溶液中，30min后取出风干。

3.4 滤纸层析用展开溶剂

3.4.1 丙酮+水（7+2）。

3.4.2 甲醇+乙醇+水（16+l+3）。

3.4.3 丙酮+无水乙醇+乙酸+水（70+10+5+3）。(1)

3.5 薄层层析用展开溶剂

3.5.1 1，2-二氯乙烷+石油醚（l+1.5）

3.5.2 二甲苯：AR

3.5.3 1，1，2-三氯乙烷：AR

3.5.4 氯仿：AR

3.6色素标准溶液(2)

3.6.1 称取红色501号（药用猩红），红色505号（油xa XO），橙色403号（橙色SS），黄色404号（黄AB），黄色405号（黄OB），绿色202号（酿茜绿SS），蓝色403号（苏丹蓝B）和油红OS各0.lg，分别溶于100ml苯中。

3.6.2 称黄色204（喹啉黄SS）0.lg溶于100ml氯仿中，过滤。

4 分析步骤

4.1样品预处理(3)

取样品10～50ml于分液漏斗中，加3～5倍体积的石油醚，充分混合后加入N，N-二甲基甲酰胺10～50ml，充分振荡。静置分层后，分取下层的N，N-二甲基甲酰胺于另一分液漏斗中，石油醚仍有颜色时，再加N，N-二甲基甲酰胺5～30ml，充分振荡萃取出色素，反复萃取，直到N，N-二甲基甲酰胺无色为止。合并全部N，N-二甲基甲酰胺萃取液，加入其1／2体积的石油醚，充分振荡后弃去石油醚。此操作重复二次后，在二甲基甲酰胺溶液中加入同体积的水稀释，再加1／2体积的氯仿，充分振荡，静置分层。分取氯仿层于另一容器中。N，N-二甲基甲酰胺液仍有颜色时，反复萃取，直到氯仿层无色为止。合并全部氯仿液，加其1/2体积的水，充分振荡弃去水相，将氯仿萃取液移人另一干燥容器中，加无水硫酸钠脱水，过滤，以尽可能低的温度蒸发。残留物溶于少量的苯作为样品溶液。

层析柱（内径1cm、长30cm，一端有狭细部）保持垂直，其狭细部的上面塞上预先浸渍石油醚并除去气泡的脱脂棉。取硅胶8g于100ml烧杯中，加石油醚30ml充分搅拌除去空气，用湿法填充在层析柱中。硅胶全部沉降后，在硅胶上面盖上比玻璃管内径稍小的圆形滤纸。待柱上部残留的石油醚全部渗入拄内时（注意液面不可低于柱面），把样品溶液徐徐注入层析柱内，然后用苯层离，并将柱上已分离的色带溶出（溶液的流出速度lml／min）(4)，稀释成适当的浓度作为吸收光谱、滤纸层析及薄层层析用待测溶液A。

用苯溶出色素后，柱内仍残留着色带时，再用氯仿(4)将色带溶出。此溶出液作为吸收光谱测定、滤纸层析和薄层层析用待测溶液B。

4.2 测定

4.2.1 吸收光谱法：测定待测溶液A的可见吸收光谱，并与红色501号（药用腥红）(5)、红色505号（油红XO）(6)、橙色403号（橙SS）（7）、黄色404号（黄AB）（8）、黄色405号（黄OB）（9）、绿色202号（醌茜绿SS）（10）、蓝色403号（苏丹兰-B）（11）及油红OS（12）的吸收光谱比较和判定。

再测定待测溶液B的可见吸收光谱，并与黄色204号（喹啉黄SS）（13）的吸收光谱比较和判定（14）。

4.2.2 滤纸层析法：将待测溶液A及色素标准溶液3.6.1的各标液分别点在用液体石腊浸过的同一滤纸，距下端4cm的位置，二点之间隔lcm，用展开溶剂3.4.1，3.4.2或3.4.3展开20～25cm。

待测溶液B则用色素标准3.6.2与上述同样操作。

4.2.3 薄层层析法（15）：将薄层层析用待测溶液A及色素标准溶液3.6.1分别点于同一薄层上，用展开溶剂3.5.1，3.5.2，3.5.3或3.5.4展开。

待测溶液B，则用色素标准液3.6.2及薄层展开溶剂3.5.4与上述同样操作。



离子对高级液相色谱法

用荧光检测器可快速、简单地测定化妆品中的8种水溶性荧光焦油色素，本方法灵敏度高、测量误差小，易于推广。

1 适用范围

本方法适用于测定化妆品中水溶性荧光焦油色素，各种色素检测限见表2-3-31。（1）

2 原理

样品中的水溶性荧光焦油色素经超声波提取后，溶解在有机相中的水溶性荧光焦油色素，用离子对高效液相色谱进行分离定性、定量。

3 试剂

3.1 乙脂。

3.2 甲醇：优级纯。

3.3 0.05mo1／L磷酸二氢钠溶液。

3.4 0.002mo1／L四溴己胺（THA）。

3.5 0.002mol/L四溴丁胺（THPA）。

3.6 0.002mo1／L十二烷基苯磺酸钠（DBS）。

3.7 0.002mol/L氯化十六烷基三甲基胺（CTA）。

3.8 色素标准品

3.8.1 红色3号（原藻红， Erythrosine），C.I.45430序号1。

3.8.2 红色104号（玫瑰红， Phloxine），C.I. 45410序号130。

3.8.3 红色105号（孟加拉红， Rosebengal）。

3.8.4 红色106号（酸性红， Acid red）。

3.8.5 绿色204号（一羟基3，6，8芘三磺酸钠，Pyranineleconc），C.I. 61565序号34。

3.8.6 红色230一1号（曙红rs Eosine），C.I.45380序号ll。

3.8.7 红色213号（蔷微红B Rhoclmine）,C.I.45170序号9。

3.8.8 黄色202一2号（荧光黄钠，Uranine）C.I. 45350序号23。

3.9 标准溶液

精确称取上述各种色素标准品10.0mg，用甲醇溶解定容至100ml。

4 仪器

高效液相色谱仪：具岛津LC一6AD型自动进样器；日本分光820一FP型荧光检测器；岛津SPD一6AV型可见光紫外检测器。

超声波水浴。

5 分析步骤

5.1 样品预处理

5.1.1 固体样品：称取样品0.5～2.0g置于50ml离心管中，加甲醇20ml混匀，用超声波水浴提取15min后，离心10min（3000r/min）。上清液用过滤器过滤，滤液作为待测样品溶液。

5.1.2 液体样品：，称取液体样品(3)，用甲醇进行适当稀释，过滤，滤液作为待测样品溶液。

5.2 色谱条件

色谱柱:Tsk gel ODS 80TM （5µm，4.6mm id×l50mm）；CAPCELL PAKC18（5µm，4.6mm id×l50mm）。(1)

流动相及检测波长见表2-3-32。(1)

流速：1ml/min；柱温： 40℃；进样量：10?l。

5.3测定

5.3.1 定性：吸取10µl各种色素标准溶液，注入HPLC，求出保留时间。取待测样品溶液10µl，注入HPLC与标准保留时间比较进行定性。

5.3.2 定量：吸取各种色素标准溶液，用甲醇稀释，配制成每毫升含0～20ng的标准系列，各取10µl注入HPLC，记录峰高或峰面积，绘制标准曲线。取待测样品溶液10µl注入HPLC，记录峰高或峰面积，从标准曲线查出对应的各种色素含量A（ng/m1）。

6 计算

色素浓度（µg/g）=A×V/m×1/1000

试中：
A一一从标准曲线查出的各种色素含量，ng/m1；

V一－样品溶液稀释的总体积，m1；

m――样品质量，g。

7 精密度和准确度

薄层色谱测定香波中色素时，表面活性剂干扰测定。但用本法进行回收试验未见干扰，香波中加入红色213号20ng/g，5次平均回收率为98.3％，变异系数2.6％。同时分析了市售香波、护发素、化妆水、膏霜、冷烫精等样品，含量在0.0059～2. 55mg/g之间。