【华山论剑第九集】如何更好的建立质谱方法？

我们用的是Thermo TSQ，优化质谱方法直接进样时，我们一般是利用注射泵进样，一般都要再接个三通，加入一定比例的流动相。
此方法的优点：直接，可快速优化各个参数
缺点：一般进样浓度为1-10ug/mL,碰到难冲洗的化合物，基线不容易降低。

用六通阀直接进样的优点是：可以用较低的浓度优化各个参数，基线容易走低。缺点是比较耗时，对仪器操作者要求较高。

此外其实用哪一种方法都行，这里有使用习惯和个人偏好的因素。

用注射泵直接进样，可以优化喷雾针电压、板电压、毛细管电压等，做二级质谱时，还可以寻找子离子和碰撞能量。总之是一些需要连续进样来优化的参数。这种方式样品用量大。

干燥气温度，流动相比例等可以通过切换阀上的定量环流动注射进样来优化。与过柱子相比，有类似的效果，但所需时间少的多。这种方式样品用量相对较少。

我们试验室用的是ABI 3000质谱仪，主要定量分析生物样品。
LC-MS/MS方法学开发的一般步骤是
首先通过微量注射泵获得母离子和子离子以及DP CE这四个主要参数
然后利用梯度程序考察流动相组成（包括有机相的比例，甲酸或缓冲盐的加入量）对质谱响应的影响。
流动相的组成确定后利用FIA优化确定其他参数，主要是气体参数和TEM IS。

我们实验室用的是premier XE
摸条件是用六通阀直接进样，个人认为蠕动泵进样污染仪器。

质谱分析原理
应用：
质谱是应用最为广泛的方法，它可以为我们提供以下信息：
a) 样品元素组成；
b) 无机、有机及生物分析的结构---结构不同，分子或原子碎片不同(荷质比不同)
c) 复杂混合物的定性定量分析------与色谱方法联用(GC-MS)；
d) 固体表面结构和组成分析-----激光烧蚀等离子体---质谱联用；
e) 样品中原子的同位素比。
历史：
1813年，Thomson使用MS报道了Ne是由22Ne和24N两种同位素组成；随后，同位素分析开始发展。在30年代末，由于石油工业的发展，需要测定油的成份。通常用蒸馏(fractional distillation)的方法先分离这些烃类混合物，然后再分别测定其折光率(refractive index)的方法来分析它们。这通常要花数天时间。40年代初开始将MS用于石油工业中烃的分析，并大缩短了分析时间。50年代初，质谱仪器开始商品化，并被广泛用于各类有机物的结构分析。同时质谱方法与NMR、IR等方法结合成为分子结构分析的最有效的手段。80年代，非挥发性或热不稳定分子的分析进一步促进了MS的发展；90年代，由于生物分析的需要，一些新的离子化方法得到快速发展；目前一些仪器联用技术如GC-MS，HPLC-MS，GC-MS-MS，ICP-MS等正大行其道。 第一节 质谱分析原理及质谱仪
一、基本原理概述
质谱分析是将样品转化为运动的带电气态离子，于磁场中按质荷比(m/z)大小分离并记录的分析方法。
其过程为可简单描述为：
离子源轰击样品 带电荷的碎片离子 电场加速(zeU) 获得动能( ) 磁场分离( ) 检测器记录
其中，z为电荷数，e为电子电荷，U为加速电压，m为碎片质量，v为电子运动速度。

二、质谱仪性能指标
1、质量测量范围
质量测定范围以原子质量单位量度，1个原子质量单位：
1u=1.6605410-27kg/12C原子
如12C=12u, CH4=16.xxxx u
在非精确测量中，常直接以原子或分子量大小来表示。
2) 分辨本领
指质谱仪分辨相邻质量数离子的能力。定义为：两个相等强度的相邻峰(质量分别为m1和m2)，当两峰间的峰谷不大于峰高的10%时，则可认为两已分开，其分辨率R为：

可见在质量数小时，分辨率亦较小。
实际工作中很难找到上述两相等的峰，常以下式表示：

W0.05表示峰高5%处的峰宽。
三、仪器组成
按质量分析器(或者磁场种类)可分为静态仪器和动态仪器，即稳定磁场（单聚焦及双聚焦质谱仪）和变化磁场（飞行时间和四极杆质谱仪）。
MS仪器一般由进样系统、电离源、质量分析器、真空系统和检测系统构成。
1、真空系统
质谱仪中所有部分均要处高度真空的条件下(10-4-10-6Torr或mmHg), 其作用是减少离子碰撞损失。真空度过低，将会引起：
a) 大量氧会烧坏离子源灯丝；
b) 引起其它分子离子反应，使质谱图复杂化；
c) 干扰离子源正常调节；
d) 用作加速离子的几千伏高压会引起放电。

2、进样系统
 对进样系统的要求：重复性、不引起真空度降低。
 进样方式：
a) 间歇式进样：适于气体、沸点低且易挥发的液体、中等蒸汽压固体。如图所示
注入样品(10-100g)---贮样器(0.5L-3L)---抽真空(10-2 Torr)并加热---样品蒸分子(压力陡度)---漏隙---高真空离子源。
b) 直接探针进样：高沸点液体及固体
探针杆通常是一根规格为25cm6mm i.d.,末端有一装样品的黄金杯(坩埚)，将探针杆通过真空闭锁系统引入样品，如图所示。
c) 色谱进样系统：将在GC-MS联用中介绍

六通阀直接进样需要流动相吗?我是新手,请多多执教

我们是利用注射泵进样。

建立方法：
1、先用六通阀直接进样，找到所需的母离子和子离子。
2、用蠕动泵+三通+分析流动相，模拟实际做样环境，调协优化各个源、透镜、分析器等参数条件。
3、利用优化好的质谱条件，用液相自动进样器进样，优化色谱分离条件。
无毕！！！
用六通阀进样能消除背影干扰，对精确选择离子有好处，但对于调协优化需频繁进样，复现难，操作费时失事！
蠕动泵能连续进行检测分析和监测，对于优化很有好处，方便；但不能消除背境。

注射泵进样，调谐简单，方便，速度相对较快，但应注意调谐完毕后毛细管的清洗。
六通阀进样，费时，操作较繁琐。
以上只是个人意见，接触质谱时间较短，还需多多学习。