摘要::本实验采用 LC-10F 高压半制备系统,选择 Venusil ASB C18(5 µm,150 Å,10×250 mm )对氨基酸样品进行了纯化。结果表明:样品在 ELSD 检测器下,流动相为 5 mmol/L 七氟丁酸 +0.7%TFA 水溶液和乙腈,进行洗脱,能够有效分离,且峰性良好。
关键词:LC-10F 高压半制备系统;氨基酸样品;Venusil ASB C18
前言 氨基酸样品的普遍检测方法都是衍生化后检测。在实际研究过程中,在动物提取 物蛋白水解后,测试其中的氨基酸组成有可能需要非衍生化的方法进行制备,将各个 得到的氨基酸分别进行鉴定等工作。本实验建立的制备纯化方法尝试使用简单的流动 相体系实现分离,并避免使用衍生化等破坏性操作。
实验部分 仪器、试剂与材料 主要仪器设备 LC-10F 高压半制备仪器, 试剂材料 水为去离子水,乙腈为制备级 色谱柱:Venusil ASB C18(5 µm,150 Å,10×250 mm) 氨基酸样品:客户提供
样品前处理 样品是无色溶液状态,用 0.22 µm 滤膜过滤后直接上样
制备条件 色谱柱:Venusil ASB C18(5 µm,150 Å,10×250 mm); 流动相:A:5 mM 七氟丁酸+0.7%TFA 水溶液 B:乙腈 检测器:ELSD 85 ℃,Gas Flow:2.0 nl/min,
流 速:4 mL/min 进样量:20 µL 梯 度:
结果与讨论
本实验采用 Venusil ASB C18(5 µm,150 Å,10×250 mm)对氨基酸样品进行了分 离,由表 1 及图 1 可知,流动相为 5 mM 七氟丁酸+0.7%TFA 水溶液和乙腈,进行梯度 洗脱时,样品分离良好。
结论
本实验采 Venusil ASB C18(5 µm,150 Å,10×250 mm)色谱柱对氨基酸样品进行 了制备。Venusil ASB C18 使用非衍生化的方法分离氨基酸分离效果良好,能够初步分 离样品。
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