摘要:本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器,并选择 Venusil® XBP C18(L)(5 μm,
150 Å,4.6 × 250 mm)色谱柱对草乌药材提取物中乌头碱进行了测定。结果表明:在波长为 235 nm,
流动相 A 为乙腈︰四氢呋喃=25︰15(v/v);流动相 B 为 0.11 mol/L 醋酸铵溶液,梯度洗脱时,测得
的乌头碱与相邻杂质峰分离度为 2.41,能够满足检测要求。
关键词:高效液相色谱法;紫外检测器;乌头碱;草乌;Venusil® XBP C18(L)色谱柱;
前言
草乌又名断肠草,为双子叶植物纲毛茛科植物乌头(野生种)、北乌头或其他多种同
属植物的俗名。乌头各部分含生物碱,其中主为乌头碱。乌头碱水解后生成乌头原碱、
醋酸及苯甲酸。
表 1. 乌头碱化学信息
实验部分
仪器、试剂与材料
试剂材料
异丙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、醋酸铵、冰醋酸、乙腈、四氢呋喃为色谱纯;
氨试液:取浓氨溶液 400 mL,加水稀释至 1000 mL,即得.
草乌药材:灰色粉末,由某设备仪器公司提供;
高效液相色谱柱:Venusil® XBP C18(L);5 μm,150 Å,4.6 × 250 mm。
样品制备
取本品 2.0 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加氨试液 3.0 mL,加入异丙醇-乙酸乙
酯(1︰1)混合溶液 50 mL,称定重量,超声处理 30 分钟,放冷,再称定重量,用异
丙醇—乙酸乙酯(1︰1)混合溶液补足减失的重量,摇匀,滤过。量取续滤液 25 ml,
40 ℃以下减压回收溶剂至干。残渣精密加入异丙醇—三氯甲烷(1︰1)混合溶液 3 mL
溶解,密塞,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品试液。
色谱条件
色谱柱:Venusil® XBP C18(L);5 μm,150 Å,4.6 × 250 mm;
流动相 A:乙腈︰四氢呋喃=25︰15(v/v);
流动相 B:0.1 mol/L 醋酸铵溶液(每 1000 mL 加冰醋酸 0.5 mL);
检测波长:235 nm;
流速:1.0 mL/min;
柱温:30℃;
进样量:10 μL;
梯度:
表 2.液相色谱梯度条件
结果与讨论
本实验采用 Venusil® XBP C18(L)色谱柱对草乌药材中乌头碱进行了测定,由表 3
及图 1 可知,流动相 A 使用乙腈︰四氢呋喃=25︰15(v/v);流动相 B 为 0.11 mol/L 醋酸
铵溶液,梯度洗脱时,乌头碱峰形、分离效果良好。
表 3. 草乌药材供试品溶液测试结果
图 1.草乌药材供试品溶液高效液相色谱图
图 2.草乌药材供试品溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大)
结论
本实验按照客户提供的测试方法,采用 Venusil® XBP C18(L)色谱柱(5 μm,150 Å,
4.6 × 250 mm)分离草乌药材中的乌头碱。结果表明色谱柱对草乌药材供试品溶液中乌头
碱与相邻杂质峰分离度为 2.41>1.5,能够满足检测要求。
附:相关产品
【飞诺美色谱】GalNAc L96的液相色谱分析方法
【飞诺美色谱】ADC药物中的游离小分子测定-液相色谱法
【飞诺美色谱】5种三磷酸核苷酸单体的IP-RP分离
【飞诺美色谱】三种UTP类似物的IP-RP分离
相关产品
关注
拨打电话
留言咨询