治疗方案

p 　　2017年11月15日，由中国食品药品国际交流中心主办、GE医疗生命科学事业部协办的“细胞治疗法规与技术研讨会”在北京召开。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/69ed878c-f1d6-4f1a-abfd-eb0e0d76b491.jpg" title=" 1_副本.jpg" / /p p 　　在研讨会期间，GE医疗在亚洲区正式发布了细胞治疗企业整体解决方案，以极富产业实践价值的整合解决方案模式，推动细胞治疗的产业化应用，促进癌症等重大疾病新型和个性化诊疗方案的开发与普及，助力精准医疗的发展和“健康中国”战略实施。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/e1e60c5c-2371-4432-8352-c269ad5d0551.jpg" title=" 2_副本.jpg" / /p p 　　细胞治疗技术的兴起，为应对癌症等重大疾病从本质上提供了全新的解决方案，正迅速改变着医疗保健领域的现状! /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/17d2a205-44fe-4cf9-8f0a-239f578cdda3.jpg" title=" 3_副本.jpg" / /p p 　　目前，在全球超过800个再生医学临床试验中，有超过40%的项目属于免疫细胞疗法，仅细胞治疗应用于肿瘤治疗市场就有望在2030年达到300亿美元的规模。截至目前，中国的干细胞治疗临床研究项目占全球的10%，而免疫细胞治疗临床研究则占全球的1/3，中国已成为仅次于美国的第二大市场。加之诸多国家政策的大力扶持，产业规模急剧增长，对细胞治疗的产业化、生产效率和可扩展性也提出了更高要求。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/4f20e1c8-5055-4f1f-b6fc-fa785c74bd0a.jpg" title=" 4_副本.jpg" / /p p 　　GE医疗生命科学事业部大中华区总经理李庆表示：“作为GE医疗集团业务增长最快的部门之一，GE医疗生命科学事业部致力于帮助高科技生物制药企业研发和生产对人类健康至关重要的革命性药品。面对细胞治疗这一突破性新疗法，GE医疗始终站在行业最前沿，凭借GE的技术专长和可扩展的生产解决方案，推动全球最新疗法的产业化应用。GE是一家能提供涵盖生物科学、工程技术和规模生产等全方位解决方案的企业，我们的细胞治疗业务将能够极大支持产业的大规模生产需求。” /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/4ca51be9-b497-416d-86c1-c60ae4acd1f7.jpg" style=" " title=" 5_副本.jpg" / /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/0135f5a6-3106-4b5b-ae8a-33c47e259026.jpg" style=" " title=" 6_副本.jpg" / /p p 　　作为GE细胞治疗解决方案的全新整合升级，此次亚洲首发的GE医疗细胞治疗企业整体解决方案涵盖模块化细胞治疗生产方案KUBio& #8482 、灵活生产平台FlexFactory& #8482 和贯穿全程的全方位服务，包括细胞治疗工艺流程开发、Fast Trak培训、项目管理和数字化咨询服务等各个方面，贯穿设备采购、初期建设乃至后期调试及装配等全程，无论处于何种建设阶段，都能极大缩短建设符合GMP标准的生产套件及设施的工程周期，确保更快速、高效的运行，提速细胞治疗药物上市，降低成本，加速实现细胞治疗的产业化。 /p p style=" text-align: center" img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/0b231eb5-98ac-44c1-96da-573a8ae1205f.jpg" title=" 7_副本.jpg" / /p p 　　其中，模块化细胞治疗生产方案KUBio& #8482 融合了世界级前沿技术和功能完备的即用型设施，采用预制模块式的生产模式，具备高度灵活的特点，能分阶段建设符合GMP标准的生产套件及设施，并根据后期生产需求的增加，添加相应模块套件，从而快速完成扩建，可有效降低前期投资风险。 /p p br/ /p

“我亲历了武汉和河北两次抗疫，根据国家版指南，新冠肺炎患者经过积极救治，病毒检测两次核酸转阴就可以出院，但核酸转阴只表示没有传染性，而非完全治愈。”2021年全国两会召开在即，全国人大代表，中国工程院院士张伯礼在接受科技日报记者采访时表示，目前新冠肺炎患者救治工作进入尾声，但出院后康复阶段的患者应引起高度关注。　　图源：新华社　　张伯礼告诉记者，今年全国两会期间，他将提交《关于重视新冠肺炎康复问题的建议》。张伯礼表示，目前虽然对新冠肺炎缺乏全病程的追访资料，但据报道，美欧新冠后遗症出现概率和严重程度均比我国严重，有关后遗症问题已引起国内外重视。我国也迫切需要进行及时全面的中西医康复干预，同时积极总结中西医康复的方案和经验，使之规范化，并进行长期追访。　　“据观察，相当一部分病人出院后仍存在活动后憋喘、肺部炎症未吸收、免疫指标紊乱、脏器功能损伤等不同程度的呼吸功能、躯体功能、免疫功能等障碍，还有疲乏、肌肉酸痛、烦躁、心悸、盗汗等表现及焦虑、抑郁等心理障碍。”张伯礼说，根据他的团队在武汉、天津、石家庄三地救治及康复经验，亟需进行及时中西医综合康复干预，及早康复、综合康复、规范康复可以达到防复阳促痊愈的目的，帮助他们早日回归岗位、回归社会。　　张伯礼提出五条建议：　　1. 相关部门对新冠肺炎患者的康复问题予以高度关注，开展一揽子新冠肺炎康复问题科学研究，建立统一的中西医康复治疗方案和评价标准 　　2. 建立康复定点医院，开展医务人员康复培训，并建立康复平台进行长期追踪观察和评估 　　3. 出台相关政策措施，鼓励患者主动康复，居家康复，自觉参与康复治疗 　　4. 康复工作中坚持中西医并重，中西药并用原则。尤其要发挥中医药的特点和优势，在统一的康复方案基础上，制定一人一策的中西医结合的个体化康复方案，有针对性地进行康复治疗 　　5. 建议相关部门将新冠肺炎患者康复期医药支出纳入医保，给予适当比例报销。有关部门在康复药品及器械研发及注册方面予以支持。　　“目前河北新增确诊病例已清零，黑龙江和吉林也已经降为个位数，全国疫情防控取得显著成效。”张伯礼认为，我国在疫情救治中，中西医结合、中西药并用已为全球抗疫贡献了中国力量，“作为康复阶段的先行者，我们也必将为未来全球新冠肺炎患者的康复治疗提供中国方案。”

基因治疗是通过将修饰的基因传递至靶细胞中，从而把患者体内的突变基因替换为相对应的健康基因拷贝来实现治疗或者预防疾病的目的。与传统的药物治疗相比，基因治疗是从根本上对疾病进行控制，所以有着非常好的发展前景，在世界范围内得到越来越多医药行业的关注和投入。 将正常基因（外源）导入生物细胞内必须借助一定的技术方法或载体，基因转移的方法分为生物学方法、物理方法和化学方法。 病毒越来越多的用作载体，用于传递基因治疗的遗传物质和疫苗应用。重组腺相关病毒（recombinant Adeno-Associated Viruses, rAAV）是基因治疗最为常用的病毒载体之一。 一、如何开发高效安全的 rAAV 疗法?为了开发通过受控和经济的制造工艺生产的高效的 rAAV 疗法，需要解决从病毒衣壳设计到确定最佳工艺和配方条件，再到全面质量控制的多重挑战。应对这些挑战，需要针对 rAAV 样品下列属性进行量身定制的分析表征： Ø 测定衣壳蛋白或者颗粒滴度（capsidor particle titer）Ø 完整 rAAV 颗粒的百分比Ø 空-载比（Full-empty ratio）Ø 颗粒的粒径Ø 聚集体形成（aggregate formation）Ø 热稳定性（Thermal stability）Ø 基因组释放（genome release）Ø 衣壳电荷（capsid charge）等 而所有这些都可能影响最终产品的关键质量属性（CQA）。 通常，rAAV 滴度和病毒载量是使用酶联免疫吸附试验（ELISA）、定量聚合酶链式反应（qPCR）、液滴数字聚合酶链式反应（ddPCR）、分析超速离心（AUC）和电子显微镜（EM）的技术组合测定的。这些方法通常既费时又费力，而且其准确性和精确性也值得怀疑[1]。因此，业内越来越需求一种不依赖于使用专用试剂和昂贵的参考标准品的快速分析解决方案。 动态光散射(DLS)、多角度动态光散射（MADLS）、电泳光散射（ELS）、尺寸排阻色谱-多角度光散射（SEC-MALS）、纳米颗粒跟踪技术（NTA）、等温滴定量热法（ITC）和差式扫描量热法（DSC）可以提供有关病毒载体的关键分析和质量属性的重要信息，从而能够对多种参数进行表征、比较和优化。 样品关键参数马尔文帕纳科的技术方案衣壳蛋白尺寸DLS、NTA衣壳蛋白及转基因的绝对分子量SEC-MALS (OMNISEC)衣壳滴度或颗粒计数MADLS, SEC-MALS(OMNISEC), NTA含基因病毒颗粒百分比分析SEC-MALS (OMNISEC)聚集形成分析DLS, MADLS, SEC-MALS (OMNISEC), NTA碎片化分析SEC-MALS (OMNISEC)热稳定性分析DLS, DSC高级结构分析DSC血清型鉴定DSC衣壳解聚及基因组注入DLS, DSC衣壳蛋白尺寸ITC电荷分析ELS表1 总结了病毒载体研究中各种重要的关键属性（CQA），以及马尔文帕纳科可以对应提供表征此类信息的各项技术。 DLS、MADLS、SEC-MALS、NTA、ITC和DSC属于无标记的生物物理技术，需要最少程度的方法开发，并且可以很容易的应用于各个阶段，强化了基因治疗开发的分析工作流程。 二、高效的表征技术概念解读动态光散射（DLS）动态光散射(DLS)是一种非侵入式技术，可以测量由颗粒分散体系或分子溶液引起的散射光强度随时间的波动。由于进行布朗运动的颗粒或者分子的随机运动，散射光的强度会随之发生波动。使用自相关算法分析这些强度波动可以确定平移扩散系数，随后根据斯托克斯-爱因斯坦方程确定流体力学尺寸。多角度动态光散射（MADLS）多角度动态光散射（MADLS）通过使用三个不同的检测角度（背面、侧面和正面）并将获取的光散射信息组合成一个与角度无关（Angular-Independent）的粒径分布，从而可以对多模态的样品进行更高分辨率的尺寸测定。应用MADLS技术的扩展还可以测量出颗粒浓度（Concentration）。电泳光散射（ELS）电泳光散射（ELS）测定来自在电场中进行电泳的颗粒或者分子的散射光的频移（Frequency Shift），并能够计算出Zeta电位。颗粒的Zeta电位是颗粒在特定介质中获得的总电荷，可用于预测分散体系的稳定性并深入了解所研究的颗粒的表面化学。尺寸排阻色谱（SEC）尺寸排阻色谱（SEC）是一种分离技术，可根据分子进出柱中多孔凝胶基质的流体力学半径来分离分子。搭配一系列先进的检测器，如光散射（LS）、UV、RI和粘度，可以测量绝对分子量、分子大小、特征粘度、支化和其他参数。差式扫描量热法（DSC）差式扫描量热法（DSC）是一种直接分析天然蛋白质或其他生物分子热稳定性的技术，无需外在荧光素或者内源荧光，它通过测定在恒定的升温速率下使生物分子发生热变性过程中的热容变化来实现。 案例研究 | 综合使用多种技术表征 rAAV性状：衣壳分子量、聚集状态、滴度、稳定性… … 1，空 rAAV5 衣壳分析SEC-MALS (OMNI-SEC)测量产生的关键数据是绝对分子量，与柱保留时间或用于校准系统的任何标准无关。在空rAAV的情况下（Fig.1 和表2），主要单体的Mw为3.84 x 106 g/mol。空衣壳蛋白的理论分子量为3.8 x 106 g/mol，证实该分析结果符合预期。 图1 rAAV5 空壳三重色谱图表2 rAAV5空壳的定量参数 Mw/Mn 描述样品的分散性，接近1的值表示峰中有单个群体，远高于1的值表示峰内有多个群体。在空 rAAV 的情况下，单体和二聚体的 Mw/Mn 值接近1，表明是单一群体。聚集体和碎片 Mw/Mn 值显著高于1，表明单个峰内具有不同分子量的多个群体（表2）。 样品的分数（Fraction of Sample）描述了样本在群体之间的分布情况，在这种情况下，84.7% 的样品是单体。蛋白质分数（Fraction of Protein）表示样品中衣壳的百分比；在这种情况下，单体是99.8%的衣壳。这证实样品是空的 rAAV5 。从这种单一分析方法中获得的另一个关键信息是样品滴度；在这种情况下，对于空的 rAAV5，测得的滴度为 5.91x1013 vp/mL。 2，完整 rAAV5 衣壳分析完整 rAAV5衣壳的SEC-MALS (OMNISEC) 分析如图2和表3所示。对于主要的单体峰，计算出的符合Mw为4.49 x 106 g/mol，其中86%为衣壳。这样，完整的rAAV5的蛋白质组分的Mw为3.86 x 106 g/mol，与表2中的空rAAV5衣壳生成的数据一致。单体部分占比93%，样品具有总滴度7.48 x 1013 vp/mL。 图2 完整 rAAV5 的三重色谱图表3 完整 rAAV5 的定量参数 3，rAAV5 稳定性研究病毒衣壳的稳定性和功能是一种平衡行为。病毒衣壳必须足够稳定以包含和保护其中的基因组，与宿主细胞表面结合，它们必须提供足够的构象稳定性以在复制位点释放基因货物。 AAV载体脱壳的机制仍然知之甚少。衣壳脱壳和基因组释放似乎需要结构变化。基于差示扫描荧光法和差示扫描量热法（DSC）收集的AAV热稳定性已发表数据，AAV热转变的Tm值与衣壳解聚过程有关，可作为AAV血清型的鉴定指标；一种血清型的空AAV衣壳和完整AAV衣壳的Tm值通常非常相似，并且它们与衣壳动力学、衣壳脱壳和基因组释放没有明显的相关性。 图3 空rAAV5 和完整 rAAV5的DSC数据比较，扣除空白和基线的DSC数据。垂直方向标记的区域具有明显不同的热转变过程。表4 从DSC获得的空 rAAV5 和完整 rAAV5 样品的热稳定性结果 文章中记录的完整和空 rAAV5 样品的DSC曲线叠加（图3），根据空 rAAV5 和完整rAAV5 样品的整体 DSC 图谱差异以及热稳定性参数（如 Tonset 和 Tm2，表 4），可以在图 3 中 DSC 曲线上识别出四个不同的区域，它们可以暂且归因于以下几点：#1■ 仅在完整的 rAAV5 中出现的区域，从50℃一直延展至 75℃，这个过程大约 30 分钟。这可能归因于热应激下衣壳蛋白结构和稳定性变化导致的 ssDNA 的动力学控制下的注射；#2■在空 rAAV5 中出现的最明显的预转变过程；#3■ 主要转变过程，即协同的 rAAV5 衣壳蛋白发生解组装，这由具有血清型特异性的 Tm 值所决定；#4■ 仅在完整 rAAV5 中出现的另外的转变过程，很可能归因于 ssDNA 的解链。结论：以上几例是综合应用马尔文帕纳科多种互补技术对基因治疗常用的AAV载体一些关键属性的表征，这些无标记生物物理技术需要最少的方法开发，可以从衣壳设计阶段到开发、配方开发和药物原料和产品进行深入表征，加强体内基因治疗开发的分析工作流程。 详细内容可参文献 (Pharmaceutics 2021, 13(4), 586 https://doi.org/10.3390/pharmaceutics13040586）[1] Burnham, B. Nass, S. Kong, E. Mattingly, M. Woodcock, D. Song, A. Wadsworth, S. Cheng, S.H. Scaria, A. O’Riordan, C.R. Analytical ultracentrifugation as an approach to characterize recombinant adeno-associated viral vectors. Hum. Gene Ther. Methods 2015, 26, 228–242 三、纳米粒度及电位分析仪：DLS/ ELS/ MADLS 马尔文帕纳科 Zetasizer Ultra 纳米粒度及Zeta电位分析仪具有真正的多角度动态光散射技术（MADLS® ），提供更高的粒度测量分辨率，及与角度无关的粒度结果，并能够测量颗粒浓度。图4 Zetasizer Ultra纳米粒度及Zeta电位分析仪 四、OMNISEC 凝胶渗透色谱仪：GPC/SEC马尔文帕纳科OMNISEC凝胶渗透色谱仪是一套完整的凝胶渗透/尺寸排阻色谱(GPC)/(SEC)，有前端色谱分离系统、检测器和软件组成，是灵敏准确的多检测器GPC/SEC 系统，可以准确测定：Ø 绝对分子量和分子量分布Ø 特性粘度和分子结构Ø 样品浓度Ø 以及其他多种关键参数图5 OMNISEC凝胶渗透色谱仪 五、PEAQ-DSC 微量热差示扫描量热仪：DSC 马尔文帕纳科 MICROCLA PEAQ-DSC 微量热差示扫描量热仪能够帮助用户快速确认维持高级结构稳定性的最佳条件，提供简洁、无缝的工作流程和自动化批量数据分析，其所提供的热稳定性信息被业内视为“金标准”技术，是一种非标记、全局性的数据。图6 MicroCal PEAQ-DSC 微量热差示扫描量热仪 关于马尔文帕纳科马尔文帕纳科的使命是通过对材料进行化学、物性和结构分析，打造出更胜一筹的客户导向型创新解决方案和服务，从而提高效率和产生可观的经济效益。通过利用包括人工智能和预测分析在内的技术发展，我们能够逐步实现这一目标。这将让各个行业和组织的科学家和工程师可解决一系列难题，如提高生产率、开发更高质量的产品，并缩短产品上市时间。 联系我们：马尔文帕纳科销售热线: +86 400 630 6902售后热线: +86 400 820 6902联系邮箱：info@malvern.com.cn官方网址：www.malvernpanalytical.com.cn