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做液相的,肯定都接触过固相萃取柱(SPE),这东西虽然小,但价格高,而且通常要求use only。在实验中,你是否遇到过使用SPE时,在淋洗,或洗脱时,溶液流的太慢。不管是老鸟还是菜鸟,你是如何解决流速过低的?有什么经验教训?欢迎讨论!
作者:肖力 任斌 陈小陆 李瑞明 刘怡 容颖慈 蓝缨(作者单位:中山大学附属第一医院药学部,广东,广州,510080 )摘要:目的:建立准确测定内源性尿嘧啶和二氢尿嘧啶血药浓度的高效液相色谱法.方法:以氟尿嘧啶(5-FU)为内标,醋酸乙酯-异丙醇混合液(85:15)为提取溶剂;色谱柱Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 靘);流动相A-0.01 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(pH 5.5),B-乙腈,梯度洗脱;流速为0.8 mL·min-1;柱温为4 ℃;检测波长为204 nm(0~14.5 min),254 nm(14.5~35 min).结果:尿嘧啶和二氢尿嘧啶线性范围为8~500 靏稬-1,线性回归方程分别为C(UH2)=61.760 8Y+0.506 5,r=0.999 8;C(U)=95.201 1Y-3.064 0,r=0.999 3,(n=7).最低检测质量浓度均为5 靏稬-1.尿嘧啶方法回收率为99.3%~107.0%,二氢尿嘧啶方法回收率为95.0%~98.3%.尿嘧啶日内RSD小于6.5%,日阍RSD小于11.7%,二氢尿嘧啶目内RSD小于9.2%,日间RSD小于12.4%.结论:本方法可用于内源性尿嘧啶和二氢尿嘧啶血药浓度的常规监测.谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208142006_383845_1609970_3.jpg
碘是人体必须微量元素之一,有着重要的生理功能,碘缺乏导致地方性甲状腺肿、地方性克汀病、甲状腺功能减退等;碘过量常导致高碘性地方性甲状腺肿、甲状腺功能亢进、甲状腺炎。人体的碘主要来源于食物,其余来源于水和空气。人体由食物提供的碘几乎占所需碘的90%以上,食物中的无机碘易溶于水形成碘离子。在消化道,碘主要是在胃和小肠被迅速吸收,空腹时1~2h即可完全吸收,胃肠道有内容物时,3h也可完全吸收。碘主要通过肾脏由尿排出,少部分由粪便排出,极少部分可经乳汁、毛发、皮肤汗腺和肺呼气排出。故通常用尿碘排出量来估计碘的摄入量。尿碘目前的检测方法主要有砷铈催化分光光度法及2016年刚推行的ICP-MS法,当然也有尿碘试剂盒法,可用于快速尿碘含量的快速筛检。鉴于碘影响人体的生长发育,故儿童和孕妇需定期对尿碘进行筛查,以评价体内碘的水平,预防相关疾病。 本文主要探讨ICP-MS测定尿碘的方法,主要内容有以下几点:1,重复ICP-MS测定尿碘的国标方法;2,比较加入硝酸和国标加入四甲基氢氧化铵(TMAH)前处理方法的不同;3,探讨有机溶剂对碘信号的增敏作用;4,儿童尿碘的含量分析和比较。一、仪器与试剂 安捷伦7700x ICP-MS,碘单元素标准溶液(1000mg/L),安捷伦内标溶液(内含In元素),曲拉通X-100化学纯,四甲基氢氧化铵(优级纯),浓硝酸(质量分数65%,UP级),乙醇(色谱纯)。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609301220_612982_1615758_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609301221_612983_1615758_3.jpg二、样本来源:本地区学龄儿童的晨尿120份。三、实验过程1. 尿液稀释剂的配制1.1 国标的方法:取质量分数 25%的TMAH 5ml和 0.1ml曲拉通X-100用超纯水稀释至500ml得(0.25%TMAH和0.02%曲拉通X-100)稀释剂。1.2 对比方法: 取浓硝酸10ml和 0.1ml曲拉通X-100及20ml乙醇用超纯水稀释至500ml得(2%硝酸和0.02%曲拉通X-100及4%乙醇)稀释剂。2. 上机尿样的制备国标的方法:取解冻并摇匀的晨尿1.0ml加1.0ml超纯水和8ml(0.25%TMAH和0.02%曲拉通X-100)稀释剂,即将尿液稀释1/10。对比方法:取解冻并摇匀的晨尿1.0ml加1.0ml超纯水和8ml(2%硝酸和0.02%曲拉通X-100及4%乙醇)稀释剂,同样将尿液稀释1/10。注:以上制得的尿液均通过0.45微米滤膜过滤方允许上机分析。3.标准溶液的配制 3.1 标准系列溶液的配制: 分别用取一定量的碘单元素标准溶液加入0.25%TMAH逐级配制成10mg/L和1.0mg/L的碘标准中间液。再分别取一定量的碘标准中间也加入0.25%TMAH制得碘标准系列溶液0μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、400μg/L。同理,用2%硝酸制得同样的标准系列溶液。3.2 碘标准工作系列溶液的配制 分别取碘标准系列溶液1.0ml,加入1.0ml尿液和8ml(0.25%TMAH和0.02%曲拉通X-100)稀释剂,制得0μg/L、1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、40.0μg/L碘标准工作系列溶液。同理,用(2%硝酸和0.02%曲拉通X-100及4%乙醇)稀释剂制得另一套的0μg/L、1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、40.0μg/L碘标准工作系列溶液。 3.3 内标溶液的配制:根据对应的碘标准工作系列溶液的配制方法,分别用0.25T%MAH和2%硝酸制得浓度为0.5mg/L的俩个不同基质的内标使用液。 4. 上机分析4.1 调谐 仪器参数:射频功率1500W,载气流速0.8L/min,辅助气流速0.30L/min,采样深度8mm,雾化室温度2℃,采样锥和截取锥均为镍锥,雾化器为同心雾化器。 调谐指标如下图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609301208_612981_1615758_3.jpg[colo