非洲猪瘟病毒

农业农村部办公厅关于非洲猪瘟病毒诊断制品生产经营使用有关事宜的通知各省、自治区、直辖市农业农村（农牧、畜牧兽医）厅（局、委），新疆生产建设兵团农业农村局: 　　非洲猪瘟病毒检测是非洲猪瘟防控工作的重要举措，意义重大。为进一步提高非洲猪瘟病毒检测结果准确性，规范非洲猪瘟病毒诊断制品生产、经营和使用行为，现就非洲猪瘟病毒诊断制品生产、经营和使用有关事宜通知如下。 　　一、自2021年1月1日起，各有关部门和单位在动物检疫或疫病监测、诊断中，对生猪及其产品开展非洲猪瘟病毒检测，应当使用已取得我部核发的产品批准文号的非洲猪瘟病毒诊断制品，确保检测结果准确。产品批准文号信息可在中国兽药信息网“兽药基础数据库”中查询。 　　二、自2020年9月1日起，所有未参加或未通过中国动物疫病预防控制中心比对试验的非洲猪瘟病毒诊断制品，以及通过比对试验但目前未申请注册的非洲猪瘟病毒诊断制品，一律停止生产经营。 　　三、通过比对试验、已申请注册但尚未获得批准的非洲猪瘟病毒诊断制品,可继续生产经营至2020年12月31日。 　　四、各地畜牧兽医管理部门要切实加强对辖区内非洲猪瘟病毒诊断制品生产经营企业监管，确保产品质量符合要求。要组织开展监督检查，违法违规生产、经营和使用非洲猪瘟病毒诊断制品行为依法进行查处。 北京明日达科技发展有限责任公司、北京维德维康生物技术有限公司和中国农业大学共同研发的非洲猪瘟病毒pcr核酸检测试剂盒获批兽药产品批准文号。

非洲猪瘟病毒提取检测试剂盒(AB盒)FT-FWSJ_风途批发_非洲猪瘟病毒提取检测试剂盒(AB盒)_Go tšwa ga poledišano ya sešireletši sa go dira modumo ya sešireletši sa go tswalela ka Afrika (AB Kit)_好试剂选风途错不了　　非洲猪瘟的爆发对我国养殖业构成了空前的挑战，将对我国养猪业及相关产业的发展产生深远的影响。近期有报道称，从部分猪血浆蛋白粉中检测出非洲猪瘟病毒核酸，这几乎宣告了猪源性饲料添加剂( 如血浆粉、血球粉、肉骨粉)的死刑。如何解决这些添加剂的出路和替代途径是需要研究的重要课题。目前频繁的生猪调运和简易的运猪车辆，是疫情长距离扩散的主要风险因素，亟待建立可监测、可追溯、符合生物安全的生猪/猪肉调运和监管系统。　　【产品名称】　　通用名称：病毒DNA提取试剂盒　　英文名称：Extraction Kit for Virus DNA　　【预期用途】　　本试剂盒主要用于疑似病毒等病原感染抗凝血、血淸、拭子、组织、饲料及环境中的病毒DNA的提取，纯化的核酸可适用于各种常规操作及PCR试验。　　【试剂盒组分】　　I、试剂盒组成及贮藏条件名称20 T50 T1、吸附柱20个50个2、收集管20个50个3、裂解液5 mL11 mL4、洗液I13 mL32 mL5,洗液II13 mL32 mL6.洗脱液1.2 mL3 mL　　2、 保存条件及有效期：室温下保存，有效期12个月.　　3、 需自备材料：无水乙醇、1.5 mL无菌离心管、1.5 mL无菌离心管(长臂型)、生理盐水、研钵、无菌　　1mL, 2OOuL、10uL枪头、记号笔等。　　【操作步骤】　　一、样品制备　　1、 血液样品：抗凝血样品置离心管中，8000转/分钟离心2分钟，取上层血浆 非抗凝血样品置离心 管中，待凝固后，8000转/分钟离心2分钟，取上层血清，置于灭菌离心管中，编号待检。　　2、 组织样品：采集脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体等病变组织样品0.1g.组织匀浆器或研钵中充分匀浆或研磨，加入1 mL生理盐水混匀，8000转/分钟离心2分钟，取上清于灭菌离心骨中，编号待检。　　3、 口腔液：进食前用拭子/口腔液采集袋或自制棉线绑纱布团吸引动物咀嚼，收集口腔液大于 500uL， 8000转/分钟离心2分钟，取上清于灭菌离心管中，编号待检。　　4、 饲料：取适量研磨后的饲料(约0.2g)，放入含1 mL生理盐水或PBS(PH为7.4)缓冲液的2 mL EP 管屮，振荡混匀，8000转/分钟离心2分钟，取上清于灭菌离心管中,编号待检.　　5、 灰尘：用无菌棉签蘸取适量环境表面上的灰尘，放入含1 mL生理盐水或PBS(PH为7.4)缓冲液的2 mL EP管中，振荡混匀，8000转/分钟离心2分钟，取上清于灭菌离心管中，编号待检。　　二、DNA的提取　　1、取裂解液200uL加入无核酸酶1.5 mL离心曾屮，分别加入血浆/血清/组织液等样品液200uL. 震荡混匀10秒或颠倒混匀10次，室温放置5分钟(如果室内温度较低时.需放置25C水浴温育)，再加入200uL无水乙醇，颠倒混匀10秒 若样品浑浊则先12000转/分钟离心1分钟处理，取上清液，以避免堵塞柱子 　　2、 将液体转入套有收集管的吸附柱中， 12000rpm离心1分钟：　　3、 弃收集管液体，向吸附柱中加600uL洗液I , 12000 rpm离心1分钟 　　4、 弃收集管液体，向吸附柱中加600uL洗液II， 12000 rpm离心I分钟 　　5、 弃收集管液体，12000 rpm离心2分钟，以彻底去除残留洗液 　　6、将吸附柱转入新的无核酸酸1.5mLEP管(长臂型)中，向柱中央滴加50 uL洗脱液，静置1分钟, 12000 rpm离心1分钟，EP管中液体即为病毒DNA。　　【注意事项】　　1、 实验前诺仔细阅读本试剂盒说明书，严格按照操作步骤执行.在操作过程中对时间、试剂体积等 粘确控制可以获得好的结果。　　2, 样本应新鲜采集使用，或低温运输储存 　　3, 样本具有潜在感染风险，核酸的提取应在核酸提取实验室的生物安全柜中进行。　　4、 核酸提取冇关耗材确保高温灭菌，提取后核酸尽快进入下一步试验或冷冻保存待用。　　5, 试剂使用前应混合均匀，试剂具有一定腐蚀性，使用时请戴手套、口罩做好防护。　　6. 低温下裂解液出现结晶数属正常现象，可在60°C水浴加热助溶后使用。　　7、 实验产生的废弃物应及时收集，远离PCR实验室进行无害化处理。　　仅供兽医诊断使用　　非洲猪瘟病毒荧光PCR核酸检测试剂盒说明书　　【兽药名称】　　通用名称：非洲猪瘟病毒荧光PCR核酸检测试剂盒　　汉语拼音:Feizliouzhuwen Bingdu Yingguang PCR Hesuan Jianceshijihe　　英文名称：African swine Fever Virus (ASFV) PCR Nucleic Acid Diagnostic Kit　　商品名称：无　　【主要成分与含量】试剂盒中含有如下组分:试剂盒组分含量阳性对照250μL/管×1管 阴性对照250μL/管×1管 PCR反应液850μL/管×1管 萌混合液150μL/管×1管 说明书1份/盒【作用与用途】 本试剂盒可用于血液、脾脏、肝脏、淋巴结、 样品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。扁桃体、肾脏、肌肉、环境样品等　　【用法与判定】　　1 用法　　1.1待检样品釆集、保存及运输　　1.1.1样品釆集　　(1) 活猪样品 无菌采集抗凝血或血清5mL　　(2) 病死猪剖检样品或屠宰场剖检样品 无菌采集死猪的牌、肺、肾、扁桃体、淋巴结、肌肉等组织样品。2〜8°C低温运至实验室用于检测。　　(3) 病猪污染的周边环境 采集与病猪相关场所的粪便、饲料、污水样品。2〜8°C低温运至实验室用于检测。　　1.1.2样品保存 采集的样品在2〜8°C保存应不超过24小时，-70°C条件下保存，避免反复冻 融。　　1.1.3样品运输泡沫箱加冰袋后密封进行运输。包装和运输应符合农业农村部《高致病性动 物病原微生物菌(毒)种或者样品运输包装规范》和交通运输部门关于危险品运输管理的有关规定。　　1.2样品处理　　1.2.1血液样品处理 抗凝血样品置于离心管中，8000 r/min离心2分钟取上层血浆，编号待 检。非抗凝血样品置于离心管中，待凝固后，8000 r/min离心2分钟取200μL上层血清，编号待检。　　1.2.2组织样品处理取适量脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体、肌肉等组织，置于研磨器或研磨管中研磨，再加适量生理盐水混匀，制成约10%的组织匀浆，8000 r/min离心2分钟，取200μL上 清于RNase/DNase-free无菌离心管中，编号备用。　　1.2.3环境样品处理　　1.2.3.1粪便、饲料样品处理方法取适量的粪便、饲料放入盛有PBS缓冲液的研磨管中研磨混匀，制成约10%的匀浆液.8000 r/min离心2分钟，取200μL上清于RNase/DNase-free无菌离心 管中，编号备用。　　1.2.3.2污水样品处理方法 直接取200μL污水进行核酸提取。　　1.3病毒核酸的提取用磁珠法或柱式法进行DNA核酸提取。　　1.4荧光PCR反应：　　1.4.1从试剂盒中取出荧光PCR反应液、酶混合液，室温融化后，2000 r/min离心5秒。设被 检样品、阳性对照和阴性对照总和为n,则反应体系配制如下：　　试剂 体系　　PCR 反应液 17× (n+1) μL　　酶混合液 3× (n+1) μL　　1.4.2在新的RNase/DNase-fire 1.5 ml离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20μL/ 管分装量将试剂分装至荧光PCR反应管。　　1.4.3在上述制备好的荧光PCR反应管中分别加入阴性对照、阳性对照各5μL、处理好的待测核酸各5μL,终体积25μL/管，盖好荧光PCR反应管盖，混匀后瞬时离心，转移到荧光PCR仪器 上。　　144将PCR反应管放置在荧光PCR仪样品槽中，在荧光PCR仪上运行以下程序：步骤条件循环数UNG处理50 ℃, 2分钟1预变性95 ℃, 3分钟1预扩增95 ℃： 8 秒 55 ℃： 8 秒 5PCR扩増95 ℃： 8 秒 55 ℃： 8 秒 40　　荧光通道选择FAM,在PCR扩增阶段每个循环的55℃时采集荧光信号。设置扩增体系为25μL, 同时要选择passive reference和quencher为none的模式。(注：若荧光PCR仪(如AB17500)按说明 书中的反应程序设置后因持温时间短无法运行，可将预扩增和PCR扩增条件变更为95C： 5秒 55°C： 30 秒)　　2结果判定　　2.1试验有效性判定　　阳性对照有典型扩增曲线且Ct值≤30.且阴性对照无Cl值或无扩增曲线，线形为直线或轻微斜线，无指数增长期。则判试验结果有效。否则，此次试验视为无效。　　2.2样品判定　　2.2.1阳性：样本检测结果Ct值≤35且有明显指数增长期，判定检出非洲猪瘟病毒核酸。　　2.2.2可疑：样本检测结果Ct值在35〜38范围内。此时应对样本进行重复检测，如果重复实验 结果Ct值仍在35〜38范围内，有明显指数增长期.则判定为阳性，否则为阴性。　　2.2.3阴性：样本检测结果Ct值38或无Ct值，判定未检出非洲猪瘟病毒核酸。　　【注意事项】(1)实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按照操作步骤执行，在操作过 程中对时间、试剂体积等精确控制可以获得好的结果。　　(2) 实验室应严格按照有关规定分区管理，依照配液区-模板提取区-扩增区-分析区顺序 进行基因检测。各区间人员、器材、试剂及空气流向应有严格要求。　　(3) 核酸提取有关耗村确保洁净、无DNase/RNase,提取过程尽量低温、快速，完成后进入 下一步实验或冻保。　　(4) 对于顶部采光仪器要带新的一次性PE手套对荧光PCR管封盖，对于底部采光仪　　器要避免徒手或使用过的手套接触荧光PCR管底，检测过程中使用不带荧光物质一次性乳胶手套。　　(5) 冻存试剂使用前应于室温下完全融化，瞬时离心使液体完全沉于管底。避免反复冻融， 以免影响试剂性能。　　(6) 样品、阳性对照等在使用后及时封盖，.避免组分间及气溶胶等的污染造成假阳性。　　(7) 扩增产物禁止开盖，实验产生的废弃物应及时收集，远离PCR实验室进行无害化处理。　　【规格】50头份/盒　　【贮藏与有效期】试剂盒置-20°C以下避光保存，有效期12个月。　　【批准文号】兽药生字163668871

p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 要了猪命 全国31个省份全部“沦陷” /span /strong br/ /p p 　　非洲猪瘟病于1921年首次在非洲的肯尼亚被报道，至今已有62个国家发生过非洲猪瘟疫情，而根除疫情的国家目前只有13个。 /p p 　　2018年以来，非洲猪瘟在全球就更加活跃，共有25个国家，发生了6500多起猪瘟疫情，部分国家呈爆发性的流行。去年8月，辽宁沈阳发生全国首例非洲猪瘟疫情，此后，疫病在黑龙江、江苏、浙江等地凶猛蔓延，到今年4月19日，海南省万宁市和儋州市发出疫情通报，全国31个省份全部“沦陷”。5月10日，香港通报首现非洲猪瘟疫情。 /p p style=" text-align: center" img style=" max-width:100% max-height:100% " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201905/uepic/7389d7d0-e591-4d50-92d3-cff54c33797f.jpg" title=" 猪.jpg" alt=" 猪.jpg" / /p p 　　从疫情发生来看，当前采取应对措施主要还是捕杀、消毒、无害化处理和提高养殖生物安全防护等措施，防护思路和措施其实大同小异。也就是说，目前对非洲猪瘟疫情猪处理方式只能算是“马后炮”，还没有成功上市的猪瘟疫苗。 /p p 　　攻克非洲猪瘟注定是一场持久战，需要能尽早发现猪瘟病毒，并及时处理，才能达到彻底扑灭非洲猪瘟病毒的目的。那么问题来了，如何检测?有哪些新型的检测技术?有没有完整的猪瘟病毒检测解决方案? /p p 　　就在刚刚成功举办的第三届“PCR技术前沿及应用”专题网络研讨会上，“非洲猪瘟病毒检测”也一度成为讨论热点，多位专家就这一话题展开精彩论述。以下摘取部分视频供读者学习。 /p p 　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　PCR在动物疫病诊断中的应用 /span /strong /p p 　　 span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai " 报告专家：王慧煜研究员，中国检验检疫科学研究院 script src=" https://p.bokecc.com/player?vid=8608463FF2FEB60B9C33DC5901307461& siteid=D9180EE599D5BD46& autoStart=false& width=600& height=490& playerid=5B1BAFA93D12E3DE& playertype=2" type=" text/javascript" /script /span /p p 　　对于动物疫病的防治，快速有效的病原检测有着非常重要的作用。在早期诊断和不完整病原体检疫方面，应用常规技术难以得到确切结果，甚至漏检。用PCR技术可对未形成病毒颗粒的DNA、RNA或样品中病原体破坏后残留的核酸分子迅速进行扩增测定，且仅需提取微量DNA分子即可以得出结果。 /p p 　　近年来基于PCR扩增技术的新型分子诊断技术与传统的诊断技术相比，更加快速、特异、敏感、准确，高通量、自动化和现场检测成为当前研发工作的重点。本报告将简单介绍PCR以及基于PCR技术的新型分子诊断技术的研究和应用，包括ASFV、SBV、PCV等动物疫病，为动物疫病的科学防控奠定基础。 /p p strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 　 /span /strong 　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 非洲猪瘟分子检测解决方案 /span /strong /p p 　　 span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai " 报告专家：王楠楠，赛默飞世尔科技(中国)有限公司农业业务市场发展经理 script src=" https://p.bokecc.com/player?vid=659E362CBE46A1569C33DC5901307461& siteid=D9180EE599D5BD46& autoStart=false& width=600& height=490& playerid=5B1BAFA93D12E3DE& playertype=2" type=" text/javascript" /script /span /p p 　　在荧光定量PCR领域，赛默飞旗下ABI品牌一直是市场领导者。关于本次非洲猪瘟，赛默飞提供两类解决方案：一是一步到位的病原检测，二是非洲猪瘟快速检测系统。对于每类方案，赛默飞从前期样品采集、样品制备、核酸提取、试剂制备到最后的荧光定量PCR操作等整个流程，都有一整套完整解决方案。 /p p 　　 strong span style=" color: rgb(0, 112, 192) " Hey猪，don’t be afraid! /span /strong /p p 　　非洲猪瘟一旦传到某一个国家以后，很难在短期内根除或者消灭掉，发生过非洲猪瘟的大多数国家都是付出了巨大人力、物力和财力。 /p p 　　但是，也不用恐慌。 /p p 　　5月25日，农业农村部发布新闻：海南6市县(区)非洲猪瘟疫区解除封锁。 /p p 　　5月29日，农业农村部发布新闻：西藏林芝市三个非洲猪瘟疫区解除封锁。 /p p 　　5月24日，中国农业科学院也公布《非洲猪瘟防控科研计划》，目前哈尔滨兽医研究所自主研发的非洲猪瘟疫苗已取得阶段性成功，且实验室研究结果表明，具有良好的生物安全性和免疫保护效果。 /p p 　　总体来说，非洲猪瘟疫情防控虽取得一定进展，但压力不小，任务仍重，需要各单位共同努力。更需要明白的是，这是未来很长一段时间，很艰巨的任务。 /p p 　　 a href=" https://www.instrument.com.cn/webinar/Video/Video/Collection/146" target=" _self" strong span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 更多视频精彩回放请点击：第二届“基因测序技术发展及前沿”主题网络研讨会 /span /strong /a /p