非洛地平浓度

中国医学专家研究发现，经典降压药非洛地平有效解决骨关节术后植入物耐药菌生物膜感染。这一研究发现可为关节假体周围感染的预防与治疗提供新思路。　　上海交通大学医学院附属仁济医院骨关节外科主任医师岳冰课题组在国际知名学术期刊《生物活性材料》在线发表了相关研究。　　据介绍，关节假体周围感染已成为骨科术后“灾难性的”并发症之一，而与之相关的假体表面生物膜形成则是最棘手的难题。倘若再合并毒性较强的常见耐药菌感染，如被称为“超级细菌”的MRSA(耐甲氧西林的金葡菌)，患者的残疾率和死亡率将会大幅增加。　 当下，如何有效预防和清除关节假体表面耐药菌生物膜感染成为了提升手术效果、改善患者预后的关键因素。这位专家解释，耐药菌一旦在假体表面形成生物膜，就会导致顽固性的反复感染。患者往往需要接受多次手术清创、灌洗、引流和长期大剂量的抗生素治疗。　　岳冰课题组经过多次实验发现，目前在临床上广泛使用的降血压药物非洛地平具有预防和清除耐药菌生物膜的能力。非洛地平联合庆大霉素可以产生较好的协同抗生物膜效果。一定浓度的非洛地平就可以清除假体表面已形成的生物膜。　　岳冰表示，非洛地平联合庆大霉素用药方案在关节假体耐药菌生物膜感染的预防和清除方面具有广阔的临床应用前景，让传统抗生素能在术后感染的防治中能继续发挥重要效果，有效减少因感染造成的外科清创次数，降低“特殊使用级”抗生素的依赖程度，为患者减轻痛苦和经济负担。

目前大多数治疗性抗体都是以静脉注射的方式进行给药，由于其伴随着病人顺应性差以及高昂的医疗成本等现实问题，使得皮下注射制剂逐渐成为行业关注的热点。相比于静脉注射，皮下注射具有提高病人的依从性，降低医疗成本等优点，而典型的皮下注射需要控制注射体积(一般为1-2ml)，从而需要提高蛋白浓度，而高浓度蛋白伴随着蛋白粘度的急剧增加，是限制皮下注射制剂的重要原因。在现实工艺开发过程中往往面临着各种难点:高粘度蛋白溶液超过粘度注射限，带来可注射性挑战高浓度高粘度蛋白更容易发生聚集，引起蛋白稳定性挑战高粘度蛋白溶液引起TFF过滤步骤的通量、工艺效率、回收率降低等挑战默克高浓度蛋白粘度降低平台 通过发挥辅料组合协同效应，有效降低蛋白粘度，提高蛋白稳定性，实现高浓度制剂皮下注射。市售制剂配方粘度对蛋白浓度的依赖性图1. 市售制剂中抗体浓度与粘度的关系从图1可以看出，随着蛋白浓度的增加，蛋白可能发生分子间相互作用或者分子拥挤，从而引起蛋白粘度的急剧升高，一些蛋白产品在浓度刚刚达到100 mg/mL时，粘度已经很高，甚至超过了粘度注射限(一般皮下注射药液粘度不超过25mPas), 此时通过注射器给药变得十分困难。为了解决这一问题，我们研究了不同的辅料组合，通过加入这些辅料组合来有效降低蛋白粘度，以满足皮下注射的要求。材料与方法选择已经在FDA或EMA注册的单克隆抗体产品进行研究。在本研究中，我们选择pH7.2的抗TNF-α嵌合单克隆抗体(mAbC) 作为模型药物，考察不同的辅料及组合对其粘度的降低效果。其中所有辅料和缓冲试剂产品均购自德国默克公司。采用装有Ultracell-30k超滤膜的Amicon® Ultra-4超滤管进行缓冲液置换和蛋白浓缩。对于辅料研究，以2000 x g的离心力进行离心并置换了5个透析体积，同时用2000 x g离心力进行浓缩。根据Lambert-Beer定律并使用BioSpectrometer® Kinetic (Eppendorf, Hamburg, Germany) 在280 nm处测量来确定蛋白浓度。用相应的缓冲液配制稀释液，使用同样的方法再次验证上述测得结果。粘度测试：将蛋白样品在20°C平衡后，用m-VROC™ 粘度计在1000 - 3000s-1的剪切速率下测量蛋白粘度。将200 μL的蛋白样品装入500 μL气密注射器中(Hamilton, Reno, USA)，重复测量3次。通过Dynapro PRIII (Wyatt Technology, Santa Barbara, USA)的动态光散射(DLS)测量粒子的扩散系数Dt，样品在25°C下采集10次，每次采集5秒。通过对mAb C在3 ~ 14 mg/mL的浓度范围内的扩散进行线性拟合，得到扩散方程Dt = D0 (1+ kD*C)，并外推得到了无限稀释下的蛋白扩散系数D0。通过绘制Dt/D0的归一化图谱从而确定扩散相互作用指数kD。通过以下公式计算注射器的推注力:结果图2. 单一辅料与辅料组合对mAbC粘度的影响图2A(单一辅料): 加入75 mM的辅料后，可以观察到蛋白粘度有轻微的降低，但降粘效果不够明显，依然不能满足皮下给药的要求（25 mPas）。即使提高辅料浓度至原来的两倍，其粘度仍然过高。结果表明，单一辅料无法有效降低mAbC蛋白粘度。图2B(辅料组合):粉红柱和黄柱分别代表将阳离子辅料和阴离子辅料分别单独添加至蛋白制剂后测定的粘度。蓝柱代表加入辅料组合的理论粘度值。紫柱代表加入辅料组合后实际测试的粘度值。结果表明，通过辅料组合的协同效应能够有效降低mAbC蛋白粘度。调整辅料组合配比，提高降粘效果图3为mAbC归一化的扩散系数Dt/D0与蛋白浓度之间的关系图。斜率为0时表示蛋白没有相互作用，斜率的负值越小表明蛋白相互作用越弱。加入不同比例的E1和E5辅料组合后，斜率的负值明显减小，提示蛋白粘度降低。当两种辅料的比例为2:1时，降粘效果最为显著。图3. Dt/D0与蛋白浓度的关系辅料组合发挥降粘协同效应图4结果显示，将几种不同的辅料及其组合分别加入mAbD制剂中，可以观察到几种特定的辅料组合实际粘度值明显低于其理论累加值，说明辅料组合具有协同降粘作用。图4. 辅料组合对mAbD溶液粘度的影响粘度降低可显著提高注射性能图5. 粘度降低对注射力的影响mAbC：当使用27G针注射原始配方的150mg/mL mAbC制剂时，所需注射力为90N，约9公斤——即一个一岁小女孩的重量；添加行标BM和E3的辅料组合后，所需注射力降为35N，约3-4公斤——一只家猫的重量mAbD：当使用27G针注射原始配方的150mg/mL mAbD制剂时，所需注射力为140N，约14公斤——一只小袋鼠的重量。添加E1和E4的辅料组合后，所需注射力降为18N，约2公斤——一个蛋糕的重量辅料组合提高蛋白稳定性I: 强降解实验设计采用自身稳定性差的mAb C作为模型药物，进行强降解实验。将150 mM的单一辅料与包含75mM阳离子和75mM阴离子的辅料组合分别添加至80 mg/mL的mAbC制剂溶液中，置于40 °C，75%相对湿度的环境下，在第0天，第14天，第28天分别取样，通过SEC-HPLC测定单体含量。II: 强降解实验结果图6. 强降解实验后蛋白溶液外观（左图为添加单一辅料，右图为添加辅料组合）图6结果显示，在强降解条件下，使用辅料组合的蛋白溶液澄清度明显优于单一辅料，表明辅料组合应用能够有效提高蛋白稳定性。图7.SEC-HPLC检测强降解实验后的单体比例（左图为添加辅料组合，右图为添加单一辅料）图7左结果表明，经过28天的强降解实验后，使用了辅料组合的制剂与原始制剂配方有相似的单体含量，即降粘辅料组合对制剂的稳定性无负面影响。图7右结果表明，使用单一辅料E1对单抗mAb C的稳定性没有负面影响，但辅料E4和E5单独使用时，会降低抗体的稳定性，从而降低单体含量。默克高浓度蛋白粘度降低平台优势(VRP)助力皮下注射制剂开发，提高可注射性，病人顺应性IP专利保护技术平台Emprove® Expert 辅料支持高风险应用，Emprove® dossiers文档支持，快速响应法规要求强化下游工艺，提高过滤通量，过滤效率，回收率，从而提高整个过滤工艺经济性辅料组合发挥协同效应，显著提高粘度下降水平并且保持蛋白粘度与稳定性之间的平衡市面上实现高剂量皮下注射的不同策略综合对比1.默克VRP平台展现出制剂开发更简单，成本更低，上市速度更快等优势。2.默克VRP平台对比酶，辅助设备，可缩短1-3年开发时间，节省30-50%开发成本，加快药物商业化上市步伐。

相信很多做分析的小伙伴都非常熟悉月旭科技提供的完整的液相色谱分析产品线，包括各类色谱柱、液相色谱仪和丰富的液相耗材产品。但对月旭科技的溶出度分析产品线可能就比较陌生了，月旭科技目前已经形成了完整的溶出度分析产品线，包括LabIndia Smart溶出仪、Dosatec全自动溶媒配制仪和溶出耗材产品。本文应小伙伴的需求，简单介绍月旭科技的溶出耗材产品线，使小伙伴更便利地获得更高品质的溶出耗材产品。月旭科技目前拥有转篮/桨/轴、溶出杯、滤芯、取样针、沉降篮、碟以及各类管路等溶出耗材，并适用于安捷伦、ERWEKA、Sotax、Pharma-Test、Hanson、Distek等等品牌的溶出仪。目前提供超过900种溶出耗材产品，并可提供定制服务。如下图所示：月旭科技溶出耗材产品线下面对主要的几类产品进行简单介绍壹转篮转篮材质一般为316不锈钢，并可进行PTFE涂层处理，可提供内径为20.2mm和24.5mm等规格，默认为40目，并提供10、20、80、100目等孔径选择，每个转篮都有编号。栓剂篮由塑料制成，是垂直槽状结构，使得样品溶解，避免堵塞，特别是当使用油基栓剂。特殊用途篮，如非洛地平四边篮和甲福明二甲双胍篮，如下图所示：非洛地平四边篮甲福明二甲双胍篮为避免转篮被污染和受到机械损伤，我们提供创新设计的转篮夹和存储工具如下图所示：转篮夹转篮储存器贰分段式转轴独具特色的分段式转轴设计，节省空间，降低了交叉污染。桨法和篮法切换时，不需要更换上段转轴，无需重新调整转轴高度并进行机械固定。为了避免转轴随意放置在桌面上和松散的抽屉里，轴和桨的弯曲和刮伤，我们设计了转轴支架方便批量地转移转轴，防止拿出过程中的滑落，节省空间，可以储存12到16根转轴。转轴支架叁沉降篮为了将漂浮的胶囊/片剂放置在溶出杯底部的某一个点，保证溶出重现性，并可以应用在比较容易黏在溶出杯的片剂上，我们设计了下列四大类沉降篮，并可提供COC和COA证书，目前很多小伙伴已经采用了我们的沉降篮。我们的沉降篮常用316不锈钢为材质，并可进行PTFE涂层，沉降篮足够的重，保证胶囊能够下沉到溶出杯的底部，并且在测试过程中不会移动，我们研究了常见的胶囊尺寸，制作了常见尺寸的沉降篮，我们还可以根据您的特殊要求，定制沉降篮。肆溶出杯溶出杯结构由上部圆柱形和下部半球形组成，1L溶积的溶出杯高度在160~210mm，内径98~106mm， 主要分为：塑料、玻璃、玻璃杯顶部带有塑料边缘；溶积分为：100mL、200mL、500mL、1L和2L；按透光性分为：透明、琥珀色，按杯底分为：圆底杯、峰底杯(Peak杯)。适配各种溶出杯的固定件、盖子和溶出杯架，如下图所示：溶出杯的固定件溶出杯的盖子溶出杯放置架（6位和8位）“全能战士”的介绍，未完待续