非酶分子

Creoptix总部位于瑞士。拥有基于光栅耦合干涉技术（Grating-Coupled Interferometry ，GCI）的光学生物传感器专利，以及外置的微流控的设计和Google公司研发的自动化软件。Creoptix致力于提供高质量的动力学数据，拥有业内高度灵敏准确的WAVE 系统，使全球生物科学研究者可以做以前不可能做的事情，看到以前看不见的数据。避开了SPR的限制，突破无标记技术的局限。Creoptix公司于2022年1月被马尔文帕纳科公司收购。WAVE分析互作仪 创新的无标记检测技术配合防堵塞微流控芯片和自动化检测软件，为您提供高质量的结合动力学数据，并适用于多种样品类型。高信噪比&灵敏度专利的光栅耦合干涉（Grating-Coupled Interferometry，GCI）技术，赋予WAVE系统超越传统SPR技术的检测灵敏度和时间分辨率。不同于SPR技术，Creoptix WAVE GCI产生的消逝波（evanescent field）仅在芯片表面与样品溶液接触，并且延长了其与样品相互作用的长度，以确保更低的信噪比(0.015pg/mm2)。凭借WAVE分子相互作用仪的低检测限，可轻松获取无标记互作分子高精度的动力学速率，亲和常数及浓度数据。即使检测丰度较低的样品，仍可确保数据不失真。创新型微流控芯片防堵塞设计微流控芯片适用于多种不同类型样品，确保样品活性和生物学特性，节约了纯化步骤所需时间以其他设备脱机、堵塞等问题可能耗费的时间。高时间分辨率准确的表征解离速率大于10s-1的分子间相互作用的动力学。灵活的组合兼容48，96，384板任意组合，120h无人值守运行。智能软件从方案建立，数据分析到报告生成的每一步均可利用向导设计来简化，让您工作更加轻松高效。应用范围 分析领域：分子相互作用模式的研究；动力学常数的测定；亲和常数测定，浓度的测量及构象变化的速率等。 生命科学研究领域：蛋白质组学研究、癌症研究、新药研发、信号传递、分子识别、热力学分析、免疫调节、免疫测定、疫苗开发、瞬时结合、配体垂钓、结合特异性、结构与功能的关系及酶反应等。 分析样品类型：小分子化合物、多肽、蛋白质、寡核苷酸、寡聚糖到类脂、脂质体，噬菌体、病毒样颗粒和细胞等。

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核酸提取服务简介高质量DNA和RNA是基因获取的前提条件，依托高品质的各种 DNA/RNA提取试剂盒，涵盖了动植物组织、血液、细菌、真菌及包括石蜡、淤泥、水样等特殊样品，可以为客户提供高质量的DNA/RNA样品，满足客户普通PCR、QPCR、文库构建、基因调取、分子标记、基因杂交等各种科研需求。主要流程1.样本裂解提取2.纯化电泳检测3.实验结果图片扫描客户提供提供样品菌样:饱和浓度样品不少于1ml，其它菌样不少106个菌 土壤淤泥样:不少于100g样品 血液样:全血不少于300ul 动物组织:不少于200mg 植物根茎叶等组织:不少于500mg最终交付交付成品DNA或RNA样品交付报告提取的质量报告(包括电泳图、浓度、质量检测等数据)。荧光定量PCR技术服务服务简介实时荧光定量PCR技术(Real- ime Quantitative PCR，qPCR)是指在PCR反应体系中加入可与DNA产物特异性结合的荧光基团(包括荧光染料或荧光标记的特异性探针），对PCR产物进行标记跟踪，随着PCR反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样即可通过荧光信号强度的变化实时监测整个PCR过程中产物量的变化，并结合相应软件对产物进行分析，可以得到荧光扩増曲线，从而计算待测样品中目的基因初始模版的量，常用于分析目的基因的表达水平的变化。广州竞远生物科技有限公司，可根据实验目的，设计实验方案(相对定量 SYBR Green I或 Taqman探针方法)，用完全按照符合国际标准(MIQE)的荧光定量PCR(qPCR)试剂完成实验，提供符合文章发表的客观事实实验报告和原始数据 SYBR Green荧光染料法:适用于任何DNA，无需设计探针，采取双标准曲线法，实验周期短，结果重复性好，灵敏度高。Taqman光探针法:经验丰富的实验技术人员设计探针，对目标基因有高特异性，实验重复性好，相对于 SYBR Green法，灵敏度更高。荧光定量PCR服务流程1、根据基因序列设计特异性的引物或荧光探针2、提取样品DNA/RNA、电泳、反转录3、 Realtime PCR(荧光定量PCR)，进行扩增曲线、溶解曲线、表达量差异分析等实验4、实验完成后，提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料 样品要求细胞＞1×106个 组织＞50mg 细菌湿重＞50mg1请提供新鲜材料或直接提供已纯化的DNA/RNA，确保总量＞5g样品。如果目的基因表达量较低时，应尽量提供更高浓度的总RNA或DNA 2.请提供已知的全长基因序列( Genebank Accession Number、 Gene ID) 3请提供尽可能详细的背景资料:生物物种信息( Human Mouse、Rat等)、DNA/RNA来源、丰度等4.客户可以提供引物，没有引物的情况下，本公司帮助设计合成。 荧光定量PCR(qPCR)报告内容总RNA(或DNA)浓度，电泳图片，扩増曲线，熔解曲线，Ct值以及数据统计分析。病毒包装1.慢病毒包装服务简介慢病毒( Lentiviruses)属于逆转录病毒科。慢病毒( Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、 MICRORNA研究以及活体动物实验中。我公司提供慢病毒载体构建、RNAi( SHRNA)、 MIRNA、过表达和干抗慢病毒包装以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。灵敏度更高。 整体实验流程1.构建质粒a.慢病毒过表达质粒载体的构建设计上下游特异性扩増引物，同时引入酶切位点，采用PCR技术(采用高保真KOD酶，3K内突变率为09％)从模板中(cDNA质粒或者文库)调取目的基因CDS区( coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。b.慢病毒干扰质粒载体的构建合成 SIRNA对应的DNA须环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体。c. MIRNA载体构建从 genomic中调取基因相应的Mir前体，并在调取引物中引入酶切位点。2.共转293T细胞3.收集病毒4.病毒转化、浓缩5.病毒感染活性鉴定6.成果交付 质量控制我们会对每一批病毒都进行滴度检测，严格控制质量，让你百分百放心。针对用携带荧光报告基因的转移质粒生产的病毒，我们会先用荧光法检测病毒的转导率，如能达到使用要求，再进一步采用qPCR法检测病毒滴度。2.腺病毒包装实验原理腺病毒( Adenovirus)是一种没有包膜的直径为70-90nm的病毒颗粒，为线状双链DNA分子，约含35000bp，两端各有长约100bp的反向重复序列 腺病毒为5型血清型腺病毒，缺失了腺病毒的早期表达基因序列E1区和E3区。E1是腺病毒复制所必须的，E1的缺失使其不能自身复制，只能依靠包装细胞如HEK293细胞提供的反式互补进行复制扩增，以此保证腺病毒的安全性。E3基因表达的蛋白能对抗宿主的抗病毒防御系统，E3区的去除能减少宿主的体内免疫反应。 腺病毒包装采用的是新的 Admax:系统，通过Cre-loxp重组酶，使共转染到HEK293细胞中的腺病毒载体穿梭质粒和骨架质粒(腺病毒基因组质粒)在重组酶的作用下产生重组腺病毒，获得的病毒滴度更高，其病毒滴度可以达到1×10^12 pfu/ml 腺病毒载体有CMV、mCMV、CAG、PGK、UbC、EF1a、等多种启动子可供选择 而且还有EGFP、 ZSGRE、Tomato、 mcherry、EYF等多种荧光标记蛋白可供选择。3.腺病毒相关病毒包装实验原理腺相关病毒( adeno- associated virus，AAV)，也称腺伴随病毒，属于微小病毒科依赖病毒属，是目前发现的一类结构最简单的单链DNA缺陷型病毒，需要辅助病毒(通常为腺病毒)参与复制。腺相关病毒血清型种类齐全，可提供AAV1、AAV2、AAV3、AV4、AV5、AV6、AAV7、AV8、AAV9、AAV-D共10种血清型，而且还可以包装双链AV( SCAAV)。巴菲尔生物的腺相关病毒载体有CMV、mC.MV、CAG、PGK、RK1、FF1a、GFAP等多种启动子可供选择 而且还有EGFP、 Zsgreen、 tdtomato、 mcherry、EYFP2等多种荧光标记蛋白可供选择 同时可以提供诱导型AAV病毒的包装，如Tet-On系统等。双荧光素酶报告基因检测实验原理通过将感兴趣的目的基因转录调控元件构建到带荧光素酶( firefly luciferase)的表达载体，如pGL3，构建成报告基因质粒，使这段DNA序列调控 luciferase的转录。然后将报告基因质粒转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，并加入底物荧光素后(luciferin)， luciferase可以催化荧光素发出荧光，从而可以通过测量荧光值的高低判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。为避免由于质粒转染细胞时效率的差异带来的误差，可以同时转入 Renilla?芡光酶素的报告基因质粒作为内参，即双荧光报告系统。该实验可以用于研究转录因子对promoter或 enhancer序列的调控，也可以用于研究受体活性，细胞内信号通路，或者 MICRORNA对基因表达的调控。 应用1.澘在启动子/启动子核心区域检测2.澘在增强子/抑制子等调控子核心元件检测3.启动子区可能的转录因子结合位点检测4.启动子/增强子与转录因子的相互作用 5.病毒/细胞相互作用 6.药物等化学诱导因素对启动子活性的调节(抑制或增强) 7.射线等物理诱导因素对启动子活性的调节(抑制或増强)8. MICRORNA靶基因验证。染色质免疫共沉淀相关服务 实验原理染色质免疫共沉淀( Chromatin Immunoprecipitation，ChIP技术主要是用于研究DNA和蛋白质的相互作用。染色质主要是由组蛋白和缠绕在上面的DNA组成。在染色质上还结合了许多转录因子、染色质重塑相关蛋白和非编码RNA。染色质上结合的蛋白或者组蛋白上不同的共价修饰可以通过改变染色质的结构，或者招募相关的因子来调控基因的表达。通过ChIP技术，我们可以研究不同的组蛋白修饰、转录因子以及染色质上结合的一些其他蛋白，在基因组上的分布。 ChIP实验的主要原理是，当DNA和蛋白结合或者距离很近时，通过甲醛固定交联，在DNA和蛋白分子之间形成共价键。将染色质通过超声波破碎或者徴球菌核酸酶处理，打断成小片段，然后通过特异性的ChIP级别抗体，富集目的蛋白。经过逆交联处理之后，消化水解目的蛋白，回收得到目的DNA，从而得到与目的蛋白相互作用的DNA信息。 整体实验流程1.细胞交联2.抗体有效性检测3.免疫共沉淀4.建库测序/PCR验证样本要求动物细胞:3x107～5x107，1％的甲醛交联，干冰运输。动物组织:0.5-2g，对于较大的组织，先切成1-5mm的组织块，干冰运输。植物组织:5-20g，干冰运输。抗体需要提前验证满足ChIP或者IP实验要求。 生物信息分析内容标准信息分析1.去接头污染，去低质量 reads和测序质量评估2.ChIP测序序列与参考基因组序列的比对3.ChIP测序唯- reads在全基因组的分布4.Peak鉴定及基因原件分析5.Peak相关基因筛选与GO功能聚类分析、 Pathway分析高级信息分析可根据客户的需求，定制高级信息分析内容 交付结果1.测序原始数据。2.实验结果类文件。3.分析析报告以及分析结果文件。4.部分发表文章用的方法描述性书写(定制性)。甲基化检测服务实验原理DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一，真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶，即在DNA甲基化转移酶( DNMTS)的作用下使CpG二核苷酸5～端的胞喀啶转变为5”-甲基胞喀啶。DNA甲基化通常抑制基因表达，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。这种DNA修饰方式在不改变基因序列前提下实现对基因表达的调控。注:M:甲基化引物PCR扩増 U:非甲基化引物PCR扩増。SW1353细胞在药物处理后从完全甲基化转变为完全非甲基化，OUMS-27细胞在5-Aza-dC处理后从部分甲基化部分非甲基化状态转变为完全非甲基化。Northern或 Southern Blot检测服务实验原理Southern杂交是进行基因组DNA特定序列定位的方法，由 Southern于1975年创建，称为 Southerne印迹技术。其原理为利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的DG标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。Northerne印迹杂交( Northern blot)是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法，主要利用碱基配对原则，利用特性的DNA探针与其杂交，经过显影技术分析RNA的最和大小。RNA印迹技术正好与DNA相对应，故被称为 Northern印迹杂交，与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为 Western blot实验流程a) Northern Blot1.完整mRNA的分离2.根据RNA的大小通过琼脂糖凝胶电泳对RNA进行分离3.将RNA转移到固相支持物上，在转移的过程中，要保持RNA在凝胶中的相对分布4.将RNA固定到支持物上5.固相RNA与探针分子杂交6.除去非特异结合到固相支持物上的探针分子7.对特异结合的探针分子的图像进行检测、捕获和分析b）Southern Blot1、制备待测DNA2、DNA限制酶消化3、琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品4、电泳凝胶预处理5、转膜6、探针标记7、预杂交8、 Southern杂交9、洗膜10、放射性自显影检测11、实验结果分析及报告样本要求1.新鲜组织:用解剖刀等迅速切成小碎块约30-100mg，放入20mL离心营中开盖液氮速东15min.80度保存，干冰运输。每个northern blot泳道提供2-3管样品。注:解剖刀处理组织的时间尽量控制在1min以内。液氮速冻时必须开盖以防炸裂。2细胞样品:县浮细胞1000-1500rpm，5min，常温离心收集细胞。贴壁细胞用胰蛋白酶消化后吹丁收集，PBS洗涤细胞，去除多余培养基和胰蛋白酶。开盖液氮速冻15min，-80度保存干冰运输，一般情况下，细胞培养的6孔板每孔细胞数量约为0.5-2*106个。每个离心管中的细胞数量控制在5*106个左右1每个泳道提供2-3管样品。3.RNA样品:RNA溶液(DEPC- treated water溶解):-80度保存，干冰运输。RNA沉淀:保存在75％乙醇(无核酶)中的RNA沉淀.2～8度保存1周，20度保存一年 加冰块低温运输。质量检测:取1-2L的RNA进行球脂糖凝胶电泳，5s，18s，28清晰可见，28的亮度应为18的1.5～2倍 无基因给污染，纯度、浓度检测:0D260/280=1.9-2.2。浓度300 ng/ul.4.DNA样品(双蒸水溶解)2-8度短期保存，-20度长期保存 加冰块低温运输。质星检测:取1-2ul的DNA进行琼脂糖凝胶电泳无蛋白质和RNA等物质污染无降解弥散，条带清晰。纯度、浓度检测:OD260/280=1.8～2.0，浓度＞100ng/uL.5.注意事项:请严格按照样品提供原则准备样品.由于未按照要求提供样品.而造成的实验结果不理想我公司不承担相应责任，请知悉。我们不接受有致病性的样品，请知悉。