化妆品中雌三醇等7种性激素检测方案(液相色谱柱)

智能文字提取功能测试中

黄体酮 “某某净”性激素加标回收率实验 雌三醇等7种性激素组分为2015版《化妆品安全技术规范》规定的禁用组分。本次实验按照2015版《化妆品安全技术规范》雌三醇等7种组分分析中的第一法，使用资生堂CAPCELL PAK C18 MG S5； 4.6mm i.d. ×250 mm色谱柱，对雌三醇等7种组分标准品以及加标实际样品进行检测分析，并对标准曲线以及回收率进行考察。 1.雌三醇等7种组分标准曲线的制作 分别称取实验室雌激素、雄激素和孕激素标准品，配制成1mL分别含4种雌激素各0.1 mg、2种雄激素各30.0 pg和1种孕激素30.0 pg的混合标准储备溶液。取混合标准储备溶液0.00 mL、1.00 mL、2.00 mL、5.00 mL于10 mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度，制得混合标准系列溶液。各组分标准曲线如图1至图7所示，线性相关系数均在0.99以上。 HPLC Conditions 色谱柱： CAPCELL PAK C18 MG S5； 4.6 mmi.d.×250mm 流动相：甲醇/水=60/40 流速：1.3mL / min温检 度：30℃ 测：204nm(雌激素)，2245nm(雄激素，孕激素) 进样量：5pL 雌三醇 图1 雌三醇标准品浓度-峰面积标准曲线图 雌酮 图2雌酮标准品浓度-峰面积标准曲线图 雌二醇 图3 雌二醇标准品浓度-峰面积标准曲线图 己烯雌酚 图4 己烯雌酚标准品浓度-峰面积标准曲线图 睾丸酮 图5 睾丸酮标准品浓度-峰面积标准曲线图 甲基睾丸酮 图6甲基睾丸酮标准品浓度-峰面积标准曲线图 图77黄体酮标准品浓度-峰面积标准曲线图 2.回收率 从客户处得到样品“某某净儿童霜”，因客户反映按照技术规范2.2"膏状、乳状样品”前处理方法，需使用饱和氯化钠溶液进行振荡溶解、再以环己烷分三次萃取、最后馏除环己烷并以甲醇溶解，操作过程复杂，加标回收率较低。 为解决该问题，实验室将前处理方法进行调整，具体方法为：称取样品1g于10mL容量瓶，加甲醇稀释至刻度，以10000 rpm 转速离心10min ， 取上清液，经0.22 pm 滤膜过滤，滤液作为样品待测溶液。 以此样品完成加标回收实验，分别测定样品溶液以及加标样品溶液，如图8和图9所示，各峰可实现基线分离，分离度良好。样品溶液雌激素、雄激素和孕激素均未检出。 图8样品溶液及加标样品溶液分析色谱图(雌激素 PDA 204 nm) 图99样品溶液及加标样品溶液分析色谱图(雄激素、孕激素 PDA 245nm) 对加标样品进行回收率计算，各组分回收率结果如表1所示，雌激素和雄激素回收率在 90%-110%左右，孕激素黄体酮回收率为 74.64%。 表1 加标回收率结果(浓度单位： ug/mL) 加标样品 加标样品峰面积 实际浓度 加标浓度 回收率 雌三醇 4017147 81.75 80 102.18% 雌酮 4892414 87.94 80 109.93% 雌二醇 5831120 87.28 80 109.10% 己烯雌酚 6632618 88.05 80 110.07% 睾丸酮 229303 4.37 4 109.36% 甲基睾丸酮 206098 3.71 4 92.71% 黄体酮 242906 4.48 6 74.64% 3.结论 综上所述，使用资生堂 CAPCELL PAK C18 MG S5； 4.6 mmi.d.×250 mm色谱柱按照2015版《化妆品安全技术规范》中雌三醇等7种组分分析中的第一法，可得到线性良好的标准曲线，对实际加标样品品用甲醇提取回收，各组分回收率良好。 注：图中色谱峰线条不平滑是由于图像在复制过程中解像度问题引起的。 LC Application Lab， Shiseido China No.31，BDA International Business Park， 2 Jing Yuan Street， Beijing Economic Technological Development Zone， Beijing， China 100176 Phone 010-5845-1809， FAX010-6785-6882 “某某净”性激素加标回收率实验 雌三醇等7种性激素组分为2015版《化妆品安全技术规范》规定的禁用组分。本次实验按照2015版《化妆品安全技术规范》雌三醇等7种组分分析中的第一法，使用资生堂 CAPCELL PAK C18 MG S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱，对雌三醇等7种组分标准品以及加标实际样品进行检测分析，并对标准曲线以及回收率进行考察。 1.雌三醇等7种组分标准曲线的制作分别称取实验室雌激素、雄激素和孕激素标准品，配制成1 mL分别含4种雌激素各0.1 mg、2种雄激素各30.0 μg和1种孕激素30.0 μg的混合标准储备溶液。取混合标准储备溶液0.00 mL、1.00 mL、2.00 mL、5.00 mL于10 mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度，制得混合标准系列溶液。各组分标准曲线如图1至图7所示，线性相关系数均在0.99以上。图1  雌三醇标准品浓度-峰面积标准曲线图图2  雌酮标准品浓度-峰面积标准曲线图图3  雌二醇标准品浓度-峰面积标准曲线图图4  己烯雌酚标准品浓度-峰面积标准曲线图图5  睾丸酮标准品浓度-峰面积标准曲线图图6  甲基睾丸酮标准品浓度-峰面积标准曲线图图7  黄体酮标准品浓度-峰面积标准曲线图2.回收率从客户处得到样品“某某净儿童霜”，因客户反映按照技术规范2.2“膏状、乳状样品”前处理方法，需使用饱和氯化钠溶液进行振荡溶解、再以环己烷分三次萃取、最后馏除环己烷并以甲醇溶解，操作过程复杂，加标回收率较低。为解决该问题，实验室将前处理方法进行调整，具体方法为：称取样品1 g于10 mL容量瓶，加甲醇稀释至刻度，以10000 rpm转速离心10 min，取上清液，经0.22 μm滤膜过滤，滤液作为样品待测溶液。以此样品完成加标回收实验，分别测定样品溶液以及加标样品溶液，如图8和图9所示，各峰可实现基线分离，分离度良好。样品溶液雌激素、雄激素和孕激素均未检出。图8  样品溶液及加标样品溶液分析色谱图（雌激素 PDA 204 nm）图9  样品溶液及加标样品溶液分析色谱图（雄激素、孕激素 PDA 245 nm） 对加标样品进行回收率计算，各组分回收率结果如表1所示，雌激素和雄激素回收率在90%-110%左右，孕激素黄体酮回收率为74.64%。表1  加标回收率结果（浓度单位：μg/mL）3.结论综上所述，使用资生堂CAPCELL PAK C18 MG S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱按照2015版《化妆品安全技术规范》中雌三醇等7种组分分析中的第一法，可得到线性良好的标准曲线，对实际加标样品使用甲醇提取回收，各组分回收率良好。 注： 图中色谱峰线条不平滑是由于图像在复制过程中解像度问题引起的。LC Application Lab, Shiseido ChinaNo.31, BDA International Business Park,2 Jing Yuan Street, BeijingEconomic Technological Development Zone,Beijing, China 100176Phone 010-5845-1809, FAX 010-6785-6882