化妆品中吡硫翁锌等19种组分检测方案

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280nm 《化妆品安全技术规范(2015年版)》修订新增――吡硫翁锌等19种组分分析 吡硫翁等19种组分检测方法为2015版《化妆品安全技术规范》中新添加的防腐剂检测方法(4.2)，该项目将自2021年5月1日起正式开始实施。 本项目的19种组分包括吡硫硫锌、水杨酸、山梨酸、苯氧异丙醇、2，6-二氯苯甲醇、苯甲酸甲酯、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、对氯间甲酚、2，4-二氯苯甲醇、邻苯基苯酚、邻伞花烃-5-醇、氯二甲酚、氯咪巴唑、苄氯酚、吡罗克酮乙醇胺盐、三氯卡班、三氯生、溴氯芬、硫柳汞钠。 其中前18种共同分析，硫柳汞钠单独分析。 标准品的分析 我们按照2015版《化妆品安全技术规范》4.2项下方法，对吡硫翁锌等18种化合物混标进行了分析，结果如下面谱图所示，我们得到了与标准谱图较为类似结果，出峰顺序和结果如下： 1.吡硫锌 2.水杨酸 3.山梨酸 4.苯氧异丙醇 5.2，6-二氯苯甲醇 6.苯甲酸甲酯 7.碘丙炔醇丁基氨甲酸酯 8.对氯间甲酚 9.2.4-二氯苯甲醇 10.邻苯基苯酚 11.邻伞花烃-5-醇 12.氯二甲酚 13.氯咪巴唑 14.苄氯酚 15.吡罗克酮乙醇胺盐 16.三氯卡班 17.三氯生 18.溴氯芬 230nm 对硫柳汞钠分析结果如下面谱图所示，硫柳汞峰能够与前后的2，6-二氯苯甲醇和苯甲酸甲酯分离。 另外，本次分析中，为了保证分析不受流动相来源鬼峰的影响，并且能获得更加平稳的基线，我们在进样器前加装了大曹三耀Ghost Cleanerl 鬼峰柱。 检测方法和结果谱图如下面所示： 检测方法： 色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5； 4.6mm i.d.×250mm Ghost Cleaner l； 4.6mmi.d.×50mm仪器：岛津20AD(二元泵体系) 流动相： A：磷酸二氢钠溶液(pH=3.80)：称取磷酸二氢钠3.9g，乙二胺四乙酸二钠 0.186g：于500mL烧杯中，加水溶解，移至1000mL容量瓶中， 准确量取三乙乙2mL， 至同一1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，即得磷酸二氢钠溶液(含0.5mmol/LEDTA-2Na)。用磷酸调周 pH至3.80。 B：甲醇 梯度条件如下： 时间 min A(%) B(%) 0.0 80 20 5.0 55 45 15.0 55 45 32.0 30 70 47.0 15 85 54.0 15 85 54.1 55 20 62.0 80 20 流速：1.0mL/min 温度：30℃ 检测： PDA230、280nm 浓度： 物质 浓度 物质 浓度 吡硫鑰锌 43.32 ug/mL 邻伞花烃-5-醇 13.248 ug/mL 水杨酸 21.08 ug/mL 氯二甲酚 42.08 ug/mL 山梨酸 4.244 ug/mL 氯咪巴唑 45.72 ug/mL 苯氧异丙醇 3.856 ug/mL 苄氯酚 13.488 ug/mL 2，6-二氯苯甲醇 40.64ug/mL 吡罗克酮乙醇胺盐 43.72 ug/mL 苯甲酸甲酯 8.84 ug/mL 三氯卡班 4.124 ug/mL 碘丙炔醇丁基氨甲酸酯 123.12 ug/mL 三氯生 12.522 ug/mL 对氯间甲酚 11.05 ug/mL 溴氯芬 12.204 ug/mL 2，4-二氯苯甲醇 47.6 ug/mL 硫柳汞钠 20.76 ug/mL 邻苯基苯酚 13.17 ug/mL 进样量：10uL 实际样品的分析 我们对化妆水和乳液两种样品，按照技术规范方法进行前处理后进样，得到结果如下面谱图所示。由于化妆水中的峰A与山梨酸峰，乳液样品中峰B与对氯间甲酚峰保留时间比较接近，我们也对光谱图进行了比较，二者均不一致。但为获得确切信息，仍建议进行质谱验证。 结果谱图： MGII-Y-S1-020.lcd PDA Ch1-230r 30.787/1.00 *18种样品前处理方法：准确称取样品1.0g，精确至0.001g，置于50mL具塞比色管中，加入甲醇8mL，涡旋振荡30s，使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取 20 min，用甲醇定容至10mL， 摇匀， 以10000 r/min 离心 5 min。取上清液经0.22 um 滤膜过滤， 滤液作为试样溶液备用。 吡硫鑰锌前处理方法：准确称取样品0.5g， 精确至0.001g， 置于50mL 具塞比色管中，加入乙腈+甲醇(95+5)40mL，涡旋振荡30s，使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20 min， 用乙腈+甲醇(95+5)定容至50mL， 摇匀， 以10000 r/min 离心5 min。取上清液经0.22 um 滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。 1.色谱柱的选择 我们尝试使用了聚合物包被型 C18 MGII 色谱柱和常规封尾 ODS 色谱柱进行了18种混标的分析对比，结果如下图所示，可明显看到峰1(吡硫翁锌)和峰15(吡罗克酮乙醇胺)在峰面积及峰型上有较大差别，这两个物质结构上均为易螯合吸附在色谱柱上的物质，因此建议选择硅醇基及残留金属离子少的色谱柱(如使用聚合物包膜技术减少死吸附的 CAPCELL PAK C18 MGII)，以得到更好分析结果。 同时，建议在使用全新色谱柱进行分析时，先进样高浓度单标(吡硫翁锌、吡罗克酮乙醇胺、硫柳汞钠)平衡可能的吸附位点，以得到更稳定的峰面积结果。 2.柱温的选择 由于在柱温30℃条件下， 峰11和12未能得到基线分离，因此我们也尝试对柱温进行了调整。在调整中发现，柱温越低，有利于峰11和12的分离，在25℃柱温下，可得到1.6分离度的结果，但低温不利于峰16和17的分离，此时二者分离度下降至0.8，对比结果下图所示。 3.梯度条件的调整 我们尝试对梯度进行了调整，但梯度调整整峰11 和12、峰16和17间的分离度没有明显改善。此外，由于保留时间 54min后没有其他物质峰，因此我们去掉了原标准中55min 下降至45%后再下降至20%的过程，而变化为直接下降到20%进行了 8min 后平衡。 分析总结 综上所述，使用 CAPCELL PAK C18 MGII 色谱柱能够按照2015版《化妆品安全技术规范》中新添添防腐剂检测方法(4.2))吡硫翁锌等 19 种组分检测方法进行分析。 下图为技术规范参考谱图： Sig=280，4 Ref=off 图1 标准溶液 HPLC 参考色谱图 (1.吡硫鑰锌，2.水杨酸，3.山梨酸，4.苯氧异丙醇， 5.2，6-二氯苯甲醇，6.苯甲酸甲酯，7.碘丙炔醇丁基氨甲酸酯，S3.对氯间甲酚，9.2.4-二氯苯甲醇，10.邻苯基苯酚，11.邻伞花烃-5-醇，12.氯二甲酚，13.氯咪巴唑，14.苄氯酚，15.吡罗克酮乙醇胺盐，16. 三氯卡班，17.三氯生，18.溴氯芬，19.硫柳汞钠) 《化妆品安全技术规范（2015年版）》修订新增——吡硫翁锌等19种组分分析 吡硫翁锌等19种组分检测方法为2015版《化妆品安全技术规范》中新添加的防腐剂检测方法（4.2），该项目将自2021年5月1日起正式开始实施。 本项目的19种组分包括吡硫鎓锌、水杨酸、山梨酸、苯氧异丙醇、2,6-二氯苯甲醇、苯甲酸甲酯、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、对氯间甲酚、2,4-二氯苯甲醇、邻苯基苯酚、邻伞花烃-5-醇、氯二甲酚、氯咪巴唑、苄氯酚、吡罗克酮乙醇胺盐、三氯卡班、三氯生、溴氯芬、硫柳汞钠。其中前18种共同分析，硫柳汞钠单独分析。 标准品的分析我们按照2015版《化妆品安全技术规范》4.2项下方法，对吡硫翁锌等18种化合物混标进行了分析，结果如下面谱图所示，我们得到了与标准谱图较为类似结果，出峰顺序和结果如下： 280nm 230nm 对硫柳汞钠分析结果如下面谱图所示，硫柳汞峰能够与前后的2,6-二氯苯甲醇和苯甲酸甲酯分离。 另外，本次分析中，为了保证分析不受流动相来源鬼峰的影响，并且能获得更加平稳的基线，我们在进样器前加装了大曹三耀Ghost Cleaner I鬼峰柱。 检测方法和结果谱图如下面所示： 检测方法：色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6mm i.d.×250mm Ghost Cleaner I; 4.6mm i.d.×50mm仪器：岛津20AD（二元泵体系）流动相：A: 磷酸二氢钠溶液（pH=3.80）：称取磷酸二氢钠3.9 g，乙二胺四乙酸二钠0.186 g，于500 mL烧杯中，加水溶解，移至1000 mL容量瓶中，准确量取三乙胺2 mL，至同一1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，即得磷酸二氢钠溶液（含0.5 mmol/L EDTA-2Na）。用磷酸调节pH至3.80。 B: 甲醇梯度条件如下：流速：1.0 mL / min温度：30°C检测：PDA 230、280nm浓度：进样量：10 µL 实际样品的分析我们对化妆水和乳液两种样品，按照技术规范方法进行前处理后进样，得到结果如下面谱图所示。由于化妆水中的峰A与山梨酸峰，乳液样品中峰B与对氯间甲酚峰保留时间比较接近，我们也对光谱图进行了比较，二者均不一致。但为获得确切信息，仍建议进行质谱验证。 结果谱图：*18种样品前处理方法：准确称取样品1.0 g，精确至0.001 g，置于50 mL具塞比色管中，加入甲醇8 mL，涡旋振荡30 s，使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20 min，用甲醇定容至10 mL，摇匀，以10000 r/min离心5 min。取上清液经0.22 um滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。吡硫鎓锌前处理方法：准确称取样品0.5 g，精确至0.001 g，置于50 mL具塞比色管中，加入乙腈+甲醇（95+5）40 mL，涡旋振荡30 s，使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20 min，用乙腈+甲醇（95+5）定容至50 mL，摇匀，以10000 r/min离心5 min。取上清液经0.22 um滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。 分析注意事项1. 色谱柱的选择我们尝试使用了聚合物包被型C18 MGII色谱柱和常规封尾ODS色谱柱进行了18种混标的分析对比，结果如下图所示，可明显看到峰1（吡硫翁锌）和峰15（吡罗克酮乙醇胺）在峰面积及峰型上有较大差别，这两个物质结构上均为易螯合吸附在色谱柱上的物质，因此建议选择硅醇基及残留金属离子少的色谱柱（如使用聚合物包膜技术减少死吸附的CAPCELL PAK C18 MGII），以得到更好分析结果。同时，建议在使用全新色谱柱进行分析时，先进样高浓度单标（吡硫翁锌、吡罗克酮乙醇胺、硫柳汞钠）平衡可能的吸附位点，以得到更稳定的峰面积结果。2. 柱温的选择由于在柱温30℃条件下，峰11和12未能得到基线分离，因此我们也尝试对柱温进行了调整。在调整中发现，柱温越低，有利于峰11和12的分离，在25℃柱温下，可得到1.6分离度的结果，但低温不利于峰16和17的分离，此时二者分离度下降至0.8，对比结果下图所示。  3. 梯度条件的调整我们尝试对梯度进行了调整，但梯度调整对峰11和12、峰16和17间的分离度没有明显改善。此外，由于保留时间54min后没有其他物质峰，因此我们去掉了原标准中55min下降至45%后再下降至20%的过程，而变化为直接下降到20%进行了8min后平衡。分析总结综上所述，使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱能够按照2015版《化妆品安全技术规范》中新添加防腐剂检测方法（4.2）吡硫翁锌等19种组分检测方法进行分析。 下图为技术规范参考谱图：