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【分享】色谱柱清洗与再生

  • 〓疯子哥〓
    2007/10/20
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 除非特殊说明,在所有情况下,所用溶剂的体积应该是色谱柱体积的40-60倍。
    应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等,比较色谱柱性能的改善,以确定清洗的效果。
    确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液,清洗前所用的溶剂应与最初清洗时所用的溶剂相溶。
    应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中最后的溶剂相溶。
    1.正相填料
    用四氢呋喃冲洗。
    用甲醇冲洗。
    用四氢呋喃冲洗。
    二氯甲烷冲洗。
    用无苯正己烷冲洗。

    2.反相填料
    用HPLC级水冲洗,冲洗时进4等份的200μl的二甲亚砜(DMSO)。
    用甲醇冲洗。
    用氯仿冲洗。
    用甲醇冲洗。

    3.阴离子交换填料
    用HPLC级水冲洗。
    用甲醇冲洗。
    用氯仿冲洗。
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  • 〓疯子哥〓

    第1楼2007/10/20

    4.阳离子交换填料
    用HPLC级水冲洗;在冲洗的过程中进4等份200μl的DMSO
    四氢呋喃冲洗。

    5.蛋白质凝胶过滤填料
    去除蛋白质尺寸排阻介质中的污染物有两种清洗/再生的方法。
    弱保留蛋白质
    用30moL/L pH3.0磷酸盐缓冲液冲洗。
    强保留蛋白质
    用100%的水到100%的乙腈梯度洗脱60min。

    6.多孔石墨化碳
    多孔石墨碳有四种再生的方法,选用哪一种方法依赖于被分析物和所用的溶剂。
    酸碱再生
    适合于使用极性流动相分析离子类分析物。
    将色谱柱倒装
    用50ml含0.1%三氟乙酸的四氢呋喃/水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
    用50ml含0.1%三乙胺或氢氧化钠的四氢呋喃/水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
    用50ml含0.1%三氟乙酸的四氢呋喃/水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
    用95%甲醇水溶液冲洗重新平衡。
    将色谱柱改为正向。

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  • 〓疯子哥〓

    第2楼2007/10/20

    强有机溶剂再生
    适合于水相分析极性或离子类分析物。
    用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
    用120ml二丁醚以1ml/min流速冲洗。
    用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
    用水冲冼至平衡。
    正相再生
    适合于主要使用正相流动相的多孔石墨化碳柱。
    用50ml二氯甲烷以1ml/min流速冲洗。
    用50ml甲醇以1ml/min流速冲洗。
    用50ml水以1ml/min流速冲洗。
    用50ml 0.1mol/L盐酸以1ml/min流速冲洗。
    用50ml水以流速1ml/min冲洗。
    用50ml甲醇以1ml/min流速冲洗。
    用50ml二氯甲烷以1ml/min流速冲洗。
    用流动相冲冼至平衡。

    三氟乙酸的去除
    适合于流动相中含有三氟乙酸的多孔石墨化碳柱。
    用加热到75℃的乙腈冲洗,同时色谱柱也要保持在这一温度。

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  • 〓疯子哥〓

    第3楼2007/10/20

    7 .带金属抗衡离子的聚合物填料
    基质是带金属抗衡离子的聚合物色谱柱,有三种再生方法,每种方法详细列于下表:


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