【求助】梯度洗脱时出现叉峰怎么办

应助达人

如果等度时各次出峰都很好，那为什么还要做梯度呢？

溶样条件是什么,在该物质出峰前加大有机相比例

等度洗脱用于测glu,后来那位老师又要做GABA,查了文献,多数用的是梯度洗脱,就只有硬着头皮做了.
洗脱程序(A相MeOH,B相PH6.0,0.1M NaAc,0.5%THF):
A ∶B (35∶65) -7min-A ∶B (60∶40) -5 min-A ∶B ( 80∶20) -4 min-A ∶B ( 80 ∶20 ) -2- minA ∶B(35∶65)
梯度完之后我用B相平衡了5min.
谢谢回复.做空白梯度时未见杂峰,我觉得是叉峰,而不是分离度不够.一般来说,叉峰原因有2:1.色谱拄塌陷.2.压力不稳.第一个因素应该排除,塌陷的话应该是每次每个正常峰都会出现叉峰.我们有自动脱气机,也不会存在气泡导致的压力不稳.我最怀疑的是是否只用B相平衡(为MeOH),有文献说含量低于5%改性剂的水冲洗,会使重复性变差,是这样吗,我是否应该在梯度结束后用95%的B相平衡呢,或者还有其它的原因呢?请高手赐教.

你的柱子的C18的吧，个人认为不管什么柱子最好不要用纯水冲，你那样不伤柱子才怪呢，你梯度走完了，确定后面没有杂峰了以后，应该用你开始的流动相比例平衡10分钟左右，再进行下一针，如果平衡时间不够的话，有可能你的重现性不好。你自己都知道不能用低于5%的有机溶剂冲，还那样做。

是不是进样量太大了，进样量小点看看

样品稀释时有问题吗？多加点水试试！

在线脱气机以及混合器有没有问题

换了根柱,一切又OK 了