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【转帖】柱色谱和薄层色谱
郁闷的巴乔
2008/08/10
私聊
薄层色谱(TLC)
实验15 柱色谱和薄层色谱
Column Chromatography and Thin Layer Chromatography
实验课时:5学时
实验类型:基本操作
一、目的与要求
1. 学习柱色谱、薄层色谱技术的原理和应用。
2.掌握溶剂极性的规律和洗脱液的配制。
3.掌握柱色谱、薄层色谱分离技术和操作要点。
4.学习旋转蒸发仪的使用
二、内容提要
柱色谱分离荧光黄和亚甲基蓝-乙醇溶液;旋转蒸发仪回收溶剂;薄层色谱分离和鉴定A、P、C成分。一人一组。
三、教学程序
1、 讲解:
1.1 色谱法的基本原理:利用混合物中的各组分在某一物质中的吸附或溶解性能(即分配)的不同,或其他亲和作用性能的差异,使含混合物的气体或溶液流经该物质时,进行反复的吸附或分配等作用,从而将各组分分开。
1.2 柱色谱
(1)柱色谱(这里指吸附色谱)的原理类似于薄层色谱,欲分离的混.合物中的各组分分配在吸附剂和洗脱剂之间,化合物被吸附剂吸附愈强,该化合物溶解在洗脱剂中则愈少,沿洗脱剂移动的距离则愈小。
(2)特点:色谱柱填充的吸附剂的量远远大于薄层板,且色谱柱大小可以依欲分离的物质的量的多少而选择,需样品的量多,可用于分离比较大量(克数量级)的物质。
(3)用途:化合物的分离与纯化;较大量(克数量级)的样品的制备。
1.3 薄层色谱
(1)薄层层析在形式上和操作上与纸层析类似,但其分离物质的原理有本质的区别。纸层析为分配层析,而薄层层析为吸附层析,其基本原理与吸附柱层析一致。
(2)需样量少,几微克即可;简单、快速。
(3)用途:化合物的分离;化合物的鉴定,同一化合物在相同条件下的Rf值相同;跟踪化学反应,判断反应进行的方向和程度;作定量分析。
2、示范:本实验演示色谱柱的装填;薄层色谱的点样方法。
3、教学安排与特定要求(如报告格式、装置图)
两人一根色谱柱,轮流做;一人一块板。
四、实验关键之处及注意事项(包括故障的排除和疑难问题的解答)
4.1 柱色谱
1、吸附剂必须均匀地填在柱内,没有气泡、没有裂缝,否则将影响洗脱和分离。
2、加入沙子的目的是使加料时不致把吸附剂冲起,影响分高效果。若无沙子,也可用滤纸覆盖在吸附剂表面。
3、为了保持柱子的均一性,使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必要的。否则当柱中溶剂或溶液流干时,就会使柱身干裂,影响渗滤和显色的效果。
4、最好用移液管将欲分离溶液转移至柱中。
4.2 薄层色谱
1、制板时,硅胶用水调成刚好能流动的糊状物为佳,勿太浓或太稀,并即刻铺在层析板上。做好的层析板应均匀一致,否则会影响分离效果。
2、点样量不能太大,否则会导致拖尾至使重点分离不完全。建议在同一层析板上依讲义图9~1点两个样点(同一样品),其中样点1点样最少一些(φ≤1mm),样点2点样量稍大一些,这样,实验的效果化较好。
3、展开剂不要加得太多(1~2ml即可),展开时不要把样点浸入展开剂中。
4、待溶剂前沿离层析板顶端仅1~2mm时方能取出,否则色点分离不完全。但溶剂不能冲顶,否则色点会扩散而影响分离效果。
5、展开结束后,应立即记下溶剂前沿的位置,并把色谱图照原样及时记录在报告本上,注明各点的颜色,并计算各点的Rf值。
6、本实验的色谱图上可出现3~6个色点,在此范围内色点越多,分离效果越好。
7、薄层层析不仅可用来分离有色物质,也可分离无色物质。
8、操作要小心,特别是点样时,不要损坏层析板。
9、实验完毕倒掉展开剂,层析缸不用洗。
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